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微流控实验：细胞共培养 2015-12-19 19:56:45

技术点：


（1）在微流控芯片中进行肿瘤细胞和内皮细胞共培养

（2）观察药物对肿瘤细胞诱导迁移的影响

（3）需要用到活细胞观察站。

微流控芯片实验方案 ：

（1）胃癌细胞与淋巴管内皮细胞在微流控芯片中的共培养

A. 微流控芯片灭菌后，采用50 mg/L 纤维粘连蛋白包被中间通道,包被时间为30 min。将处于对数生长期的胃癌细胞消化，吹打均匀，通过微注射泵将4×104个／ml 40μl，1min内泵入一侧通道内，然后放入37℃培养箱中孵育0.5 h，待大部分细胞贴壁后用PBS冲洗未贴壁的细胞。定期更换新鲜培养基。

   活细胞工作站观察时间：24小时

B. 微流控芯片灭菌后，采用50 mg/L 纤维粘连蛋白包被中间通道,包被时间为30 min。将处于对数生长期淋巴管内皮细胞进行消化，吹打均匀，通过微注射泵将4×104个／ml 40μl，1min内泵入一侧通道内，然后放入37℃培养箱中孵育0.5 h，待大部分细胞贴壁后用PBS冲洗未贴壁的细胞。定期更换新鲜培养基。

    活细胞工作站观察时间：24小时

C. 微流控芯片灭菌后，采用50 mg/L 纤维粘连蛋白包被中间通道,包被时间为30 min。将处于对数生长期的胃癌细胞和淋巴管内皮细胞进行消化，吹打均匀，通过微注射泵将4×104个／ml 40μl，1min内分别泵入两侧通道内，然后放入37℃培养箱中孵育0.5 h，待大部分细胞贴壁后用PBS冲洗未贴壁的细胞。定期更换新鲜培养基。

   活细胞工作站观察时间：24小时

（2）SNP对胃癌细胞诱导迁移的影响

A. 用微注射泵往条件通道中注射SNP浓度为10-3,10-2,10-1，0 μM/L的培养基，胃癌细胞侧注射浓度为1μM/L的普通培养基，

B. 注射速度：50μL/h；

C. 培养24小时后，统计迁移到条件通道中胃癌细胞数量，并留存照片。

D. 每一个浓度重复3次（n=3）


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