实验流程----------- 1.测定蛋白质分子量 2.数据分析------------------------------------------------样品要求----------- 1.蛋白质纯度要高,具体情况具体沟通; 2.蛋白质样本游离小分子浓度不可过高,建议脱盐处理; 3.蛋白质浓度需要在uM以上,具体情况具体沟通; 4.样本邮寄必须低温。------------------------------------------------交付结果------------ 1.蛋白质分子量测定结果; 2.小分子与蛋白质的结合数目。
实验流程------------ 1.根据目的蛋白氨基酸序列信息合理选择蛋白酶; 2.酶解; 3.酶解后的肽段混合物在高效纳升液相色谱上进行分离,并使用超高分辨率质谱仪对其进行检测;4. 数据分析,采用目前国际主流的糖基化数据分析软件Byonic进行数据检索,有效去除假阳性结果,提高鉴定结果可靠性。------------------------------------------------样品要求1.目的蛋白含量在20ug以上,纯度在80%以上;2.溶液样本须告知详细的溶液组成;3.请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。------------------------------------------------交付结果------------ 1.实验流程; 2.前处理基本方法; 3.LC-MS/MS参数; 4.糖基化鉴定结果列表;
实验流程1.各个样本取出相同量的蛋白质进行酶解;2.富集样本中的磷酸化多肽;3.各自取出一部分磷酸化多肽,掺入重标标准肽段分级后,DDA数据采集构建谱图库;4.各个样本掺入重标肽段,采集各个样本的DIA数据;5.软件结合DDA与DIA的数据进行磷酸化定量分析------------------------------------------------样品要求1.各个样本蛋白质总量在mg以上;2.溶液样本须告知详细的溶液组成;3.如自行进行蛋白质抽提需告知蛋白质抽提详细过程;4.请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。------------------------------------------------交付结果1.实验流程;2.前处理基本方法;3.LC-MS/MS参数;4.磷酸化蛋白质定性、定量结果列表;5.差异蛋白筛选列表;6.生物信息学分析:GO注释,KEGG通路分析、蛋白质相互作用网络图分析。
实验流程实验具体过程根据重标肽段的具体构成有所不同。通常实验流程分为三步1.目标蛋白质定量多肽序列与保留时间鉴定使用胰蛋白酶对各个样本相同的蛋白量进行酶解,酶解后的肽段混合物掺入重标肽段后在高效液相色谱上进行分离,并使用超高分辨率质谱仪对其进行检测,检测得到的结果使用软件进行检索分析。软件根据MS2谱图的信息,并结合经典的正反库搜库策略对MS2谱图进行解析,并得到重标和内源性轻标肽段鉴定结果,记录其保留时间,编辑包含重标与轻标肽段信息的PRM方法。2.PRM采集各个样本定量多肽质谱数据各个样本掺入相同的已知量的重标肽段后,进样相同的肽段量,质谱PRM方法采集定量肽段数据。3.软件抽提重标与内源性轻标肽段定量子离子色谱峰面积,根据峰面积比值计算出内源性轻标肽段的含量,进而得出内源蛋白的绝对含量。------------------------------------------------样品要求1.各个样本蛋白质总量在100ug以上;2.溶液样本须告知详细的溶液组成;3.若使用绘制标准曲线的方法进行绝对定量分析,客户必须提供空白基质样本;4.请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性------------------------------------------------交付结果1.实验流程;2.前处理基本方法;3.LC-MS/MS参数;4.蛋白质定量结果列表;
实验流程实验流程分为三步1.目标蛋白质定量多肽序列与保留时间鉴定 使用胰蛋白酶对各个样本相同的蛋白量进行酶解,酶解后的肽段混合物在高效液相色谱上进行分离,并使用超高分辨率质谱仪对其进行检测,检测得到的结果使用软件进行检索分析。软件根据MS2谱图的信息,并结合经典的正反库搜库策略对MS2谱图进行解析,并得到肽段鉴定结果,进而得到蛋白质鉴定结果,根据蛋白质鉴定结果找出感兴趣的目标蛋白质可用于定量的肽段,并记录其保留时间,编辑PRM方法。 2.PRM采集各个样本定量多肽质谱数据 各个样本进样相同的肽段量,质谱PRM方法采集定量肽段数据。 3.软件抽提定量肽段子离子色谱峰面积用于定量分析。------------------------------------------------样品要求1.各个样本蛋白质总量在100ug以上; 2.溶液样本须告知详细的溶液组成; 3.请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性------------------------------------------------交付结果1.实验流程; 2.前处理基本方法; 3.LC-MS/MS参数; 4.蛋白质定量结果列表;