实验服务
精湛品质、合理价格、专业服务
PPL技术中心CAR-T服务项目流程巴傲得生物坐落在美丽的古城南京东郊，江苏生命科技创新园内，为国家级高新技术企业。其下属的PPL技术中心，承载公司的产品研发、技术输出、项目服务等功能。其中CAR-T细胞治疗技术研究一直是重要方向。目前已经成功构建20余种抗原靶点CAR产品，CD19-CAR、HER2-CAR已经完成临床前实验，即将开展临床研究，目前与国内多家医院达成合作意向。同时我们提供的CAR-T技术服务项目也已经多家科研单位开展合作。关于科研CAR-T技术服务项目，我们提供的大致流程如下：1 抗原制备根据客户提供的靶点抗原的基因信息，进行分析，构建胞外段蛋白真核表达载体，并进行蛋白表达。周期8~12周，费用2~3万元。2 单克隆抗体制备使用流程1获得的蛋白抗原，利用巴傲得的专利技术(一种单克隆杂交瘤的制备方法，专利号：ZL2012 1 0280494.4)进行小鼠免疫，获得免疫效果后取小鼠脾细胞进行细胞融合，使用抗原蛋白进行筛板，挑选有效的单克隆抗体细胞株，并表达纯化抗体。我们在蛋白抗原免疫的同时，还会额外使用DNA免疫的方法同时免疫其他对照小鼠，免疫效果好的也会列入下游筛选流程。周期4~6月，费用3~5万元。3 scFv调取提取流程2获取的单克隆抗体细胞株RNA，逆转录获得cDNA模板，调取抗体CDR区基因序列，测序比对，优化序列后，将VH与VL克隆连接形成scFv表达质粒。周期2~4周，费用0.8~1万元/细胞株4 CAR载体构建使用流程3获取的scFv，根据客户需求的CAR的代次，构建完整的CAR慢病毒表达载体。周期3~4周，费用0.5~2万元/CAR5 慢病毒包装使用流程4获得Lenti-CAR进行慢病毒包装，获得不低于107的慢病毒滴度液，用于CAR-T细胞的制备。周期2~4周，费用1~2万元/CAR6 CAR-T细胞制备与扩增使用流程5获得的慢病毒滴度液感染T细胞，获得表达CAR基因的效应T细胞，并检测转导效率。周期3~4周，费用1~2万元/108T细胞7 体外细胞杀伤实验使用流程6获得的效应T细胞，进行肿瘤靶细胞、靶抗原稳转细胞、对照细胞等细胞株共培养杀伤实验。周期与费用，根据实际实验安排，待定。8 裸鼠动物模型构建与体内杀伤实验构建目标肿瘤裸鼠动物模型，并使用流程6获得的效应T细胞进行治疗处理，设置实验对照组，获取实验数据。周期与费用，根据实际实验安排，待定。 关于scFv的筛选，有第二套方案可供选择，具体流程如下：1 抗原制备根据客户提供的靶点抗原的基因信息，进行分析，构建胞外段蛋白真核表达载体，并进行蛋白表达。周期约8~12周，费用2~3万元。2 小鼠免疫使用流程1获得的蛋白抗原，进行小鼠免疫，获得免疫效果后取小鼠脾脏。我们在蛋白抗原免疫的同时，还会额外使用DNA免疫的方法同时免疫其他对照小鼠，免疫效果好的也会列入下游筛选流程。周期2~3月，费用1~2万元。3 scFv筛选提取流程2获取的免疫后小鼠脾脏RNA，逆转录获得cDNA模板，使用通用引物调取抗体CDR区基因序列，获得大量混合的VH和VL序列，测序比对，并使用QPCR分析表达丰度，选择高表达VH和VL随机组合，高通量PCR完整表达构建，高通量转染，再使用流程1获得的胞外段蛋白进行筛板，获取有效的scFv序列。周期2个月左右，费用8~10万元该方案的特点是，周期短，可以筛到尽可能多的scFv序列。 后续流程与上面的方案流程一致。服务合作方式：双方签订合同后，我们将安排实验，采取阶段式付费方式。按照上述流程，每完成一个环节，会将相关结果交付给客户，付费后，进行下一环节实验安排。最终的实验数据与实验材料都将归客户所有。
服务内容：一、分子生物学 质粒构建、病毒包装、PCR/Q-PCR、基因检测、分子杂交、基因沉默二、细胞生物学 细胞分离、细胞检测、细胞模型构建、信号转导、流式三、蛋白质相关 蛋白表达与纯化、Western-blotting、蛋白检测、质谱分析四、基因相关基因合成、基因测序、文库构建五、基因工程抗体 人鼠嵌合抗体改造、scFv转变为Fab、scFv-Fc融合蛋白、IgG改造六、免疫学 免疫组化、ELISA、免疫沉淀、免疫荧光、抗体制备与检测七、动物体内实验 皮下或原位移植肿瘤动物模型、毒理实验、药理实验八、CAR-T细胞治疗 单抗制备、scFv筛选与验证、CAR构建、慢病毒包装、T细胞转导、细胞杀伤实验、裸鼠模型实验服务对象:1. 临床医生：最前沿的临床发现，最贴近应用的科研思维，但有限的时间和精力，无法亲力亲为完成研究课题。2. 在职科研人员：忙碌的工作使得科研课题无法有效地、连贯地开展，无法按时结题。3. 制药公司：验证实验只是简单的操作，重要的是结果，交给专业的我们，更省心。4. 其他无法亲历实验的研究人员。服务流程:1. 客户提供课题方案 2. PPL评估课题（周期及费用） 3. 客户确认技术方案 4. 签订合同 5. 支付项目启动款 6. 开始实验 7. 定期反馈实验进展与结果 8. 课题完成，提交完整的实验流程记录、实验结果及分析 9. 支付尾款
服务内容服务价格（元）服务周期分子量鉴定600/蛋白1-2周蛋白鉴定1500/蛋白2-3周磷酸化修饰6000/样品2-3周乙酰化修饰6000/样品2-3周提供蛋白组学分析
服务内容服务价格（元）服务周期ScFv转变为Fab120004-5周ScFv转变为单链-Fc或Fc融合蛋白120004-5周ScFv或Fab转换成IgG120004-5周人-鼠嵌合抗体改造询价4-5周仿制药生物表达设计与构建询价商定注：交付实物为改造后的scFv克隆载体和1mg左右表达抗体抗体表达与纯化（已有成熟表达菌株）1000/mg2-3周注：需要更多表达纯化的抗体，费用再行商定嵌合抗体构建表达服务 客户提供抗体基因或者单克隆抗体细胞，按照客户要求可将鼠源抗体的可变区（VL&VH）接到人源的恒定区（CH1、CH2、CH3 和 CL）中，并在哺乳动物细胞中大量表达。 抗体改造、表达及纯化服务 提供ScFv、Fab、ScFv-Fab、全分子抗体的质粒构建和表达，能进行抗体片段间和全分子抗体的改造和表达。
服务内容服务价格（元）服务周期双荧光素酶报告基因检测询价3-4周