样品要求样品类型相应要求 菌体1. 说明载体抗性类型,我们提供 Amp, Kan, Tet 及 Chl 四种抗生素。 2. 提供 1ml 左右过夜培养的菌液,加 15% 灭菌甘油,于 Eppendorf 管中封口保存,防止交叉污染或渗漏。 3. 大量样品测序,建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养。 4. 建议尽量提供穿刺培养的菌种。 质粒1. 质粒溶于适量体积双蒸水中(不含 TE ),电泳检测总量大于 2mg 。2. 建议用相关试剂盒纯化。 3. 如有可能,同时提供 1ml 含有相应质粒的菌液备用。 4. 大质粒必需注明载体长度。 未纯化 PCR 产物1. 片段大于 150bp 。 2. 提供 50ul ~ 100ul PCR 扩增产物 ( 总量 500ng-1ug) 。 3. 取 3ul 样品,电泳检测应为明亮的一条带,无杂带。 纯化 PCR 产物1.PCR 产物溶于双蒸水中(不含 TE )。2. 浓度大于 20ng/ul ,体积大于 20ul ,长片段需适当增加量。 3. 电泳检测条带专一。自备的引物1. 浓度不低于 5pmole/ul( 或 5umol/L) ,体积大于 20ul 。 2. 随机引物和简并引物不能用于测序。 3. 尽可能提供引物全序列、 PCR 退火温度,以供参考。
siRNA/shRNA构建技术服务本公司提供siRNA 载体的构建服务,siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shRNA ,其干扰效果等同于siRNA ,而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所属物种,本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列,在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。闪晶生物siRNA载体构建服务程序: 1. siRNA表达载体的选用: 本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记,可以建立稳定表达系,同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因,可以无限扩增。 2. 设计siRNA靶序列 A 、根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19 - 21nt 长。 B 、对于每条选定的siRNA 靶序列,设计 siRNA 正义链和反义链,以 loop(9nt) 相连,称为 shRNA(short hairpin RNA)。 C、阴性对照的设立. 3. 合成模板: 合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链,退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点,同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点,可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。 4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后,1 %琼脂糖凝胶电泳,回收线性载体。 5. 连接与转化: 把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶,插入片断与载体的摩尔比约为 3 : 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌,在LB Amp培养基上涂板,37 ℃培养过夜。 6. PCR 鉴定 7. 测序鉴定 8.柱抽提阳性克隆载体并定量收费标准 siRNA载体构建订单下载个数价格(¥)时间1-3个siRNA表达载体构建1800.00/个14个工作日4-10个siRNA表达载体构建1500.00/个20个工作日10个以上协商协商闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个腺病毒慢病毒构建包装扩增纯化服务
基因突变 定点突变 亚克隆通过实验方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 变异,包括碱基添加、删除、点突变等。服务要求 1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的全部详细序列;突变前序列请标注为: Wild sequence ;突变后序列请标注为: Mut sequence 。2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料,例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。操作程序1. 如您提供的模板序列为非闪晶公司的测序结果,我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。2. 根据突变方案设计合成突变引物,进行基因突变实验的 PCR 反应,克隆变异体。3. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。4. 提供实验结果,包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种(穿刺菌)、测序结 果、测序彩色峰图等。5. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。收费标准突变点1个2个3个3个以上
免疫印迹技术服务(western blot)免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹(western blot)常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。闪晶生物为您提供全套免疫印迹(western blot)技术服务和相关的试剂耗材。主要实验步骤如下:蛋白质抽提实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。实验对象为细胞样品(细胞培养),每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。2. 蛋白质定量:按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。 3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。 4. 蛋白质转移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,30mA恒流条件下,4°C转移过夜。 5. western blot膜的封闭和抗体孵育膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。加入HRP标记的二抗体以结合一抗,室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。6. western blot结果检测:化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片扫描保存为*文件,并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。 7. western blot数据分析:目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。8. 提供实验报告,包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。更详细的操作说明 Western Blot操作规程western blot费用:每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可以做8个样品。每张膜的费用是:1500.00元。一抗另计,其它试剂免费,一抗订购时间约为3周。乘车路线:火车站坐1号地铁到终点站,然后换5号地铁坐到北桥站即可。时间:约2-3周。联系:master@shinegene.org.cn shinegene@vip.163.com 电话:021-54460831-11 荧光定量PCR
荧光定量PCR探针合成 (免费提供探针设计(仅限闪晶公司客户,如果不在闪晶公司合成的,请不要发邮件过来打扰,我们没有那么多的时间去处理邮件),设计好后发给客户确认,然后再合成标记,成功率>99%)名 称2 OD(¥)5 OD(¥)时 间Taqman(5'Fam,3'Tamra) (5'JOE/NED,3'BHQ1/BHQ2) (5'Vic,3'BHQ1)1200 元 / 次 1800 元 / 次1800 元 / 次1500 元 / 次2500 元 / 次 2500 元 / 次7 个工作日7 个工作日7 个工作日Taqman(5'Fam/hex,3'Eclipse)1200 元 / 次1500 元 / 次7 个工作日分子信标(5'Fam,3'Dabcyl)1500 元 / 次1800 元 / 次7 个工作日MGB探针(VIC-MGB/NED-MGB)3000 元 / 次3500 元 / 次7 个工作日5'Quasar570,3'BHQ25'Quasar670,3'BHQ23000 元 / 次 3000 元 / 次3500 元 / 次 3500 元 / 次7 个工作日 7 个工作日MGB探针-分子信标合成订单下载备注:每合成一条探针,免费赠送一对引物! 专业设计合成标记分子信标探针/环状RNA探针/非编码RNA探针/ncRNA探针/lncRNA探针/circRNA探针/MGB探针/Taqman探针