RNA组织样品保护液RNA 组织样品保存液是一种水溶性、无毒性组织储存试剂,其可迅速渗透到组织内以稳定和保护细胞的RNA。使用该溶液便不再需要立即处理组织样本,亦无须将样本在液氮中冷冻待随后处理。 收集组织块并浸没于RNA 组织样品保存液中保存,这样就不会破坏后续RNA提取过程中获得的RNA的品质和数量。RNA 组织样品保存液是一种水溶性、无毒性组织储存试剂,其可迅速渗透到组织内以稳定和保护细胞的RNA。使用该溶液便不再需要立即处理组织样本,亦无须将样本在液氮中冷冻待随后处理。 收集组织块并浸没于RNA 组织样品保存液中保存,这样就不会破坏后续RNA提取过程中获得的RNA的品质和数量。RNA 组织样品保存液可广泛应用于动物组织样本,包括脑、肾、脾、肝和肺等组织,以及细胞、细菌、血液中有核细胞的保存。 产品特点存放在组织样品保护液中的组织可以在常温保存1周,37℃保存1天,4℃至少保存1个月,组织4℃浸泡过夜后-20℃或-80℃可长期保存,冻存于-20℃或-80℃的组织可反复冻融20次 产品优势即时核糖核酸酶灭活无须液氮和冷冻保存最大限度地减少冻结完美进行实地收集灵活的组织存储与大多数RNA分离操作兼容。1.保存组织前需先估算组织重量,如果组织样本过大需进行剪切,使任何一边的最大厚度不能大于0.5cm,并据此加入至少10倍体积的RNA组织样品保存液(举例:组织100mg需1ml RNA 组织样品保存液)。为完全有效的保护组织样本,该组织样本应完全浸没入RNA组织样品保存液中。2.对于培养细胞的操作,先沉淀细胞,用PBS洗一次,然后加1ml的RNA组织样品保存液保存液保存。3.对于细菌的操作,先离心收集细菌,用PBS洗一次,再用少量的PBS悬浮细胞,加入2倍体积的保存液保存。4.对于全血中白细胞的保存,需将白细胞从红细胞和血清中分离出来,并按组织培养细胞一样处理后,白细胞便能有效地保存在RNA组织样品保存液中。不要将全血、血浆或血清直接加入RNA保存在RNA组织样品保存液中,因为它们蛋白含量过高,与RNA组织样品保存液混合后易形成不溶的沉淀。5.贮存于RNA组织样品保存液中的样品组织4℃可至少保存1个月、室温1周和37℃1天。对于-20℃或-80℃长期保存,先将样本在4℃条件下过夜渗透,然后将组织从RNA组织样品保存液中取出后放入-20℃或-80℃长期保存。样本可随后在室温下解冻及再冻存,其RNA的质和量都不会受影响。6.从RNA组织样品保存液中取出组织样品,细菌和细胞样品需要离心12000rpm 1min去除保存液后就可以用RNA提取的试剂盒 (Trizol等商业化试剂盒)直接提取RNA。【注意事项】1. RNA组织样品保存液只能用于新鲜组织,在浸入RNA 组织样品保存液之前不能冷冻组织2. 该试剂不适合于保存植物叶片,其表面的腊表皮使RNA组织样品保存液很难完全渗入组织中。磁珠法核酸DNA/RNA提取试剂盒吉玛公司倾情推出全新磁珠法核酸纯化系列试剂盒,采用先进的超顺磁珠和独特的缓冲液系统,从血液、脊髓液、细胞、组织等各类生物样本中分离纯化高质量核酸,包括基因组DNA、RNA、病毒DNA/RNA。整个过程不涉及有机试剂,甚至免去蛋白酶K,不带来抑制物,不需要离心,安全、便捷,最快5分钟就可以完成提取,纯度高,质量稳定可靠,尤其适合微量样本的提取和高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的RNA可适用于各种常规操作,包括测序、酶切、RT-PCR、文库构建等实验。【磁珠结构】【磁珠性能】【方法特点】【产品优势】【纯度效果评价】通过测定洗脱液中DNA/RNA的A260来确定RNA产量,通常情况下A260值在 0.1~1.0之间数据比较可信。如果不在此范围内,请稀释或浓缩样品调整;通过测定洗脱液中RNA的A280和A230来确定RNA纯度,A260/A280比值在1.8-2.0之间,小于1.8表示可能有蛋白质污染,A260/A230应该大于2.0,太小表示有盐离子残留。
慢病毒产品1、慢病毒对照吉玛提供无关序列阴性对照慢病毒,阴性对照价格实惠病毒类型滴度200ul400ul600ul1mlshRNA慢病毒NC对照108TU/ml50080010002000shRNA慢病毒NC对照109TU/ml1000150020003000病毒类型滴度200ul400ul600ul1ml过表达慢病毒NC对照108TU/ml1000180025003880过表达慢病毒NC对照109TU/ml15002300310048802、shRNA慢病毒产品慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。即用型Lentivirus shRNA构建包装服务Lentivirus shRNA服务特点适用于原代培养细胞,难以转染的各种细胞可用于制备多种稳定沉默特定基因的细胞株您通过GenePharma SupersilencingTM Vector方法筛选到有效的的基因沉默靶点,如果您需要构建慢病毒载体来满足实验需求Lentivirus shRNA载体GenePharma Supersilencing Vector 干扰载体 包装载体:Helper vector-IHelper vector-IIHelper vector-III提高包装效率和对特定细胞的感染力,提高生物安全性品质保证客户自己提供的序列委托我们制备的病毒颗粒,我们确保制备的病毒颗粒携带片段的正确性,确保病毒颗粒的总数和病毒颗粒的滴度达到合同规定的要求。shRNA高效表达慢病毒载体构建1. 通过专业设计人员的精心筛选获得欲筛选的shRNA序列。2. 设计shRNA 正义、反义链,选择相应loop结构,加上酶切位点的目的序列。3. 合成相应的DNA序列,然后克隆相应的慢病毒表达载体。4. 将载体转化到宿主菌中进行克隆、筛选,得到质粒重组体即shRNA表达载体。5. shRNA表达载体在真核细胞中可产生shRNA,从而在细胞内产生特定基因的沉默效果。此方法是多种shRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。本公司为您提供shRNA高效表达慢病毒载体构建服务。构建好的shRNA表达载体,可直接用于转染细胞进行RNA干扰操作。 服务要求 1. 通过E-mail发送订单,告知选定的相应的基因信息,待构建的靶点信息。靶基因在NCBI数据库中的Gene ID、Accession No.2. 我们可为您免费设计shRNA序列.订购流程1. 请用E-mail或者电话联系吉玛公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-513201952. 根据客户提供的基因信息设计shRNA序列,并由客户确认。 3. 根据客户提供的shRNA序列信息或经客户确认的siRNA序列信息设计引物。 4. 根据所选择的慢病毒载体构建相应的shRNA表达载体。 5. 在完成相应的试验后,我们将为您提供一套完整的实验结果,其中包括:实验操作说明、电子版的测序结果及彩图、构建好的shRNA慢病毒表达载体质粒及其甘油菌等。 目录号产品名称规格价格交货期限C06001慢病毒干扰载体 LV-1 (pGLVU6/GFP)50μg ¥1,0002周C06002慢病毒干扰载体 LV-2 (pGLVU6/Puro)50μg ¥1,0002周C06003慢病毒干扰载体 LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro)50μg ¥1,0002周C06004慢病毒干扰载体 LV-9 (pGLVU6/RFP)50μg ¥1,0002周C06005慢病毒干扰载体 LV-10 (pGLVU6/RFP/Puro)50μg ¥1,0002周C06006慢病毒干扰载体 LV-12 (pGLVU6/luci05/Puro)50μg ¥1,0002周C06007慢病毒干扰载体 LV-15(pGLVH1/RFP/Puro)50μg ¥1,0002周C06008慢病毒干扰载体 LV-16 (pGLVU6/Firefly/Puro)50μg ¥1,0002周 病毒包装及滴度测定根据客户的需要克隆目的片段或shRNA序列到所需要的慢病毒载体,然后进行细胞转染及病毒生产。产品提供形式1 构建好的慢病毒载体第一次包装与纯化,滴度至少为1×10^8TU/ml。2 包装与纯化后的病毒载体续包装,每次包装滴度至少为1×10^8TU/ml。3 如果需要大量病毒液用于动物实验,我们可提供滴度达10^10 TU/ml以上高度纯化的病毒液。4 现有的GAPDH阳性对照病毒液,每支包装滴度至少为1×10^8TU/ml。 目录号产品名称规格价格交货期限D01001客户定制序列的慢病毒颗粒(提供免费设计)一个基因一个序列(1ml,10*8 TU/ml)¥2,88021个工作日D01002客户定制序列的慢病毒颗粒(提供免费设计)一个基因一个序列(1ml,10*9 TU/ml)¥3,88021个工作日D02001shRNA慢病毒超值套餐(一个基因设计4个序列,一个阴性对照,各1ml,10*8 TU/ml)1 套¥9,80030个工作日D02002shRNA慢病毒超值套餐(一个基因设计4个序列,一个阴性对照,各1ml,10*9 TU/ml))1 套¥13,00030个工作日D03001慢病毒阴性对照(10*8 TU/ml)200 ul¥5006个工作日D03002慢病毒阴性对照(10*8 TU/ml)600 ul¥1,0006个工作日D03003慢病毒阴性对照(10*8 TU/ml)1 ml¥1,8006个工作日D03004慢病毒阴性对照(10*9 TU/ml)200 ul¥1,0006个工作日D03005慢病毒阴性对照(10*9 TU/ml)600 ul¥2,0006个工作日D03006慢病毒阴性对照(10*9 TU/ml)1 ml¥3,0006个工作日D04001筛选有效干扰慢病毒10*8 TU/ml询价50-70个工作日D04002筛选有效干扰慢病毒10*9 TU/ml询价50-70个工作日备注:慢病毒需要干冰件运输,除江浙沪外所有地区,需要加收¥300 运费。3、慢病毒超值套餐吉玛公司倾情推出慢病毒系列产品,为广大科研工作者在新的一年里提供有力的干扰手段,解决转染效率低,抑制效率不高的难题。我们的慢病毒包装快速(3-4周),性价比高,定制1ml滴度为10的9次方TU/ml的病毒液只需要3880元/ml吉玛提供多种多样的慢病毒构建服务服务项目服务编号服务描述交货期价格 Lentivirus载体构建 GLV-01根据客户提供的基因信息设计四个靶点,或者客户提供靶点序列,吉玛公司负责构建相应慢病毒载体3周1000元/条载体
CRISPR/Cas9基因编辑技术服务CRISPR/Cas系统是存在大多数细菌(40%)和古细菌(90%)中的一种天然免疫系统,可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas系统是存在大多数细菌(40%)和古细菌(90%)中的一种天然免疫系统,可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR指的是规律成簇的间隔短回文重复(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)。 Cas为CRISPR相关基因(CRISPR-associated genes)。当噬菌体感染细菌后,病毒DNA进入细菌细胞,细菌细胞表达Cas复合体对噬菌体DNA进行切割得到间隔序列,间隔序列在Cas1 和Cas2作用下插入到CRISPR最前端(如图Phase1)形成免疫。当噬菌体再次感染细菌时,以较为简单的Type II型CRISPR/Cas9系统为例,细菌表达 tracrRNA、前体crRNA及Cas9蛋白(RNA引导的核酸内切酶),tracrRNA和crRNA由于部分序列互补而结合,Cas9与tracrRNA和crRNA形成复合体并由Cas9 RNaseIII加工成为成熟crRNA-tracrRNA Cas9复合体,成熟复合体由crRNA上的间隔序列引导识别病毒靶序列(包括间隔序列及前间隔序列邻近基序Spacer及PAM protospacer adjacent motifs),并切断病毒DNA(如图Phase2)。2013年1月,在Science上发表了两篇以链球菌CRISPR/Cas9系统为基础对哺乳动物细胞进行基因组编辑新方法,利用一条gRNA(guid RNA)模拟成熟的 crRNA-tracrRNA复合体与Cas9共同作用切割靶基因组(如下图),由此揭开了该技术的运用高潮。 到目前为止CRISPR/Cas9技术已经运用到了各种细胞以及大肠杆菌、酿酒酵母、拟南芥、烟草、高粱、水稻、小麦、线虫、果蝇、蚕、斑马鱼、非洲爪蟾、小鼠、大鼠、猪、羊等,从最低等的微生物到哺乳动物的基因敲除修饰或突变,另外一方面其强大的基因组编辑能力已经用于生物治疗研究,如 HIV HBV等RNA病毒引起的疾病治疗研究,单基因或多基因遗传病治疗研究,癌症治疗研究等方面。CRISPR/Cas9技术相比其它基因组编辑技术,如锌指核酸酶(ZFNs)或转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靠蛋白结构域识别靶DNA,其以RNA与DNA互补识别为基础,操作更简单,更高效,同时可针对同一细胞中的多个基因位点进行编辑,该技术可成为替代目前基因组工程方法的一种更安全,毒性更低的新方法。技术运用1、基因敲除(Gene Knockout)利用双gRNA双剪切或Donor载体同源重组直接移除miRNA/lncRNA基因序列或蛋白编码基因的关键外显子,使其发生移码突变,从而使靶基因功能完全丢失,也可利用单gRNA单剪切编码外显子造成的非同源直接结合修复NHEJ使基因产生移码突变。2、基因敲入(Gene Knockin)通过基因断裂诱导的同源重组,选择性将靶基因敲入Rosa26位点(人细胞选择敲入类似基因THUMPD3-AS1),靶基因可以是小RNA,lncRNA或蛋白编码基因,条件性敲入还可实现基因表达的实时控制。3、基因修饰/突变(Gene Modification/Mutation)通过基因断裂诱导的同源重组,可以在原基因中插入报告基因或标签序列,实现目的基因的检测、追踪和功能研究;也可以改变原有基因的编码序列来研究其对基因功能的影响。4、基因编辑以外的运用(Other Applications)利用dCas9(Defect Cas9)与特殊功能蛋白结构域的融合表达,还可使其发挥特殊功能。与转录激活(VP64)或转录抑制蛋白结构域的融合表达,还可实现特定基因的过表达或干扰;与荧光蛋白的融合表达,可用于染色体染色;与表面抗原的融合,可用于纯化特定基因组片段等。技术运用指南1、确定实验目的A、基因敲除 单gRNACas9系统(NHEJ造成蛋白编码基因Indel移码突变) 双gRNACas9系统(造成关键外显子、miRNA或lncRNA因片段缺失)单gRNACas9系统(造成基因组断裂,诱导同源修复机制)+Donor载体(用于同源修复,两边带有同源臂,中间带真核抗性基因,方便阳性筛选)B、基因敲入单gRNACas9系统(造成基因组断裂,诱导同源修复机制)+Donor载体(用于同源修复,两边带有同源臂,中间带过表基因原件及真核抗性基因)C、基因修饰/突变单gRNACas9系统(造成基因组断裂,诱导同源修复机制)+ssDNA/Donor载体(用于同源修复,造成基因组点突变或插入修饰片段)D、基因转录激活gRNA dCas9-VP64系统(gRNA dCas9识别基因转录启动子区,VP64激活基因转录)2、确定所要编辑的细胞或物种A、脂质体易转染细胞使用质粒系统 体外转录gRNA+Cas9 mRNA/Cas9蛋白B、脂质体难转染细胞 使用质粒系统电转化、借助慢病毒、腺病毒或腺相关病毒系统介导gRNACas9的导入 C、斑马鱼、小鼠或大鼠显微注射导入体外转录gRNA和Cas9 mRNA/ Cas9蛋白及DonorCRISPR/Cas9基因编辑技术相关载体图谱服务项目完成周期收费标准备注单gRNA/gRNA Cas9载体构建7个工作日1000元/个提供质粒20-50ug双gRNA Cas9载体构建14个工作日2600元/个提供质粒20-50ug基因表达激活gRNA dCas9-VP64载体构建7个工作日1000元/个提供质粒20-50ugDonor载体构建30-60个工作日3-5元/bp+1000元Donor载体用于同源重组,提供质粒20-50ug;特殊序列需另外计费Knockin载体构建30-60个工作日3-5元/bp+1000元Knockin载体用于基因定点敲入,提供质粒20-50ug;特殊序列需另外计费各物种Cas9编码序列优化及构建,gRNA表达载体构建30-60个工作日3-5元/bp+1000元根据客户要求设计并构建相关载体,提供质粒20-50ug;特殊序列需另外计费T7-gRNA ,Sp6-gRNA载体构建7个工作日1000元/个用于体外转录gRNA,提供质粒20-50ugT7-Cas9,SP6-Cas9载体3个工作日500元/个用于体外转录Cas9,提供质粒20-50uggRNA体外转录服务 Cas9 mRNA/Cas9蛋白7个工作日1000/2000元转录产物可用于转染、细胞显微注射等gRNA Cas9/dCas9-VP64慢病毒载体构建及病毒包装服务30-60个工作日6000-10000元/株提供10的7次方到8次方TU病毒gRNA Cas9腺病毒/腺相关病毒载体构建及病毒包装服务30-60个工作日6000-10000元/株提供10的8次方到9次方TU病毒突变效率T7E1检测及测序15个工作日3500元/个检测细胞内gRNA Cas9诱导基因突变效率Cas9 稳定表达细胞株3个工作日5000元/株提供25T细胞瓶基因敲除/修饰稳定细胞株3-6个月30000元/株要求细胞系增值能力强gRNA Cas9载体快速构建试剂盒3个工作日1000元/(10次)提供各种gRNACas9载体快速构建试剂盒T7E1 突变检测试剂盒3个工作日600元/(50次)提供T7E1及突变阴性及阳性对照DNAgRNA Cas9剪切效率体外检测试剂盒3个工作日详细价格请咨询体外切割效率检测基因敲除/修饰小鼠/大鼠4-9个月详细价格请咨询 gRNA dCas9相关载体构建及后续服务 详细价格请咨询可实现特定基因过表达,基因干扰,染色体染色及纯化特定基因组片段等目的
miRNA质粒载体MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控(如右图所示)。GenePharma MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA,经过Drosha(RNaseⅢ)作用形成small hairpin pre-miRNAs(约70nt),再过Dicer作用形成成熟的microRNA(约22nt),作用靶mRNA,起到表达调控作用。MicroRNA 表达载体构建MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控(如右图所示)。GenePharma MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA,经过Drosha(RNaseⅢ)作用形成small hairpin pre-miRNAs(约70nt),再过Dicer作用形成成熟的microRNA(约22nt),作用靶mRNA,起到表达调控作用。microRNA过表达载体吉玛提供两种过表达的方式:1. 从天然的基因组序列中表达pre-miRNA转录本构建pre-microRNA。插入序列不仅包含pre-miRNA茎环结构,同时构建100-200bp长的上下游两端的侧翼序列。使用使用pol-Ⅱ(如CMV)启动子,这种构建方式保证高水平的表达pre-microRNA。表达出来的pre-miRNA的生理活动尽可能接近天然状态。 使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型(如吉玛pEX系列 M核过表达载体ﻉ,我们完成序列合成,质粒构建。目录号产品名称规格价格交货期限C08001质粒型microRNA 过表达载体-1(pre-miRNA+flanking sequences, ~500bp)50μg¥2,5003-4周2. 利用吉玛优化过的载体,模拟内源miRNA-155的表达模块,这种构建方法解决了不同miRNA表达效率差异的问题,同时也有效的避免了有些内源miRNA表达时产生-3p,-5p的问题。miRNA的发夹序列融合在EGFP报告基因的后面,模拟miRNA在体内的成熟过程。GenePharma microRNA载体元件信息及用途特征用途CMV promoter高表达目的基因EmGFP利用荧光显微镜观察转染效果Blasticidin resistance gene可用来筛选稳定细胞系Spectinomycin筛选含有已经转化质粒的E. colipUC origin质粒可以在E. coli中进行高拷贝使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息,我们完成序列合成,质粒构建。目录号产品名称规格价格交货期限C08002质粒型microRNA 过表达载体-2(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)50μg¥1,0002-3周microRNA抑制子表达载体吉玛提供两种miRNA抑制子载体构建的方式:1. ;)PAN>利用吉玛优化过的载体,模拟内源miRNA-155的表达模块,来表达miRNA inhibitor序列。这种构建与吉玛miRNA过表达方式2使用同样的载体系统,方便客户使用同一套系统完成miRNA的过表达与抑制。使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息,我们完成序列合成,质粒构建。目录号产品名称规格价格交货期限C08003质粒型microRNA 抑制子载体-1(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)50μg¥1,0002-3周2. miRNA sponge(海绵)载体构建:吉玛通过构建载体,表达包含多个成熟miRNA结合位点的RNA序列,通过吸附结合成熟miRNA,从而抑制miRNA的作用,从而进行功能缺失性研究。miRNA sponge的特点:a. 由于miR Sponges是由质粒编码的,它能够通过真核表达载体或包装慢病毒颗粒达到稳定沉默细胞microRNA的目的;b. 能够沉默整个家族的microRNA以达到对整个家族microRNA功能的研究;c. 可以利用miR Sponges实现体内外loss of function研究;d. 可以用来检测luciferase靶基因报告系统分析;e. 可以自由组合串联不同miRNA抑制子序列,达到沉默多种不同miRNA的目的。使用这种构建方式,客户需提供miRNA的具体信息、预构建miRNA inhibitor的重复数及预构建inhibitor的序列信息,我们完成序列合成,质粒构建。目录号产品名称规格价格交货期限C08004质粒型microRNA 抑制子载体-2(microRNA inhibitor sponge, 3重复)50μg¥1,5003周microRNA靶基因荧光素酶报告载体吉玛采用Promega的psicheck2.0的载体系统完成靶基因3’ UTR质粒载体构建服务。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR构建。psicheck2.0报告基因检测系统用来检测siRNA/miRNA与靶基因是否可能存在调控作用,该报告系统报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR区域,通过对该荧光的监测,即可验证siRNA/miRNA对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参,用于监测质粒表达效率。严格的实验体系,要求miRNA与mRNA 3’ UTR验证实验中需要构建靶mRNA的点突变载体,以验证靶点作用有效性。突变载体构建主要依据预测的miRNA与靶基因3’UTR的稳定结合区域(即种子区)。通过种子区全部碱基或部分碱基突变导致miRNA与靶基因3’UTR区域的结合能力大大降低,从而判断是否存在miRNA的调控作用。完成miRNA靶基因报告基因载体构建,需要客户提供:miRNA具体信息,预测靶基因信息,miRNA与靶mRNA结合位点信息。目录号产品名称
全基因合成与传统的从生物体的核酸(基因组DNA或mRNA)钓取方法相比,人工合成全基因有以下优点:(1)合成周期短,还可以保证序列100%正确无误;;(2)可以对密码子进行优化,以提高基因的表达效率;由于每个物种偏爱的编码子不同,当异源蛋白在 E.coli 里表达时,有些蛋白很难得到高表达。如果将真核生物偏爱的密码子改为原核生物偏爱的密码子,就可以实现真核生物的基因的高效表达;(3)当只知道某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列时,也可以通过人工合成基因的方法进行克隆和表达;(4)可根据需要进行基因的定点突变以改造基因;(5)研究人员根据自己的意愿设计得到自然界中很难获得甚至不存在的基因与传统的从生物体的核酸(基因组DNA或mRNA)钓取方法相比,人工合成全基因有以下优点:(1)合成周期短,还可以保证序列100%正确无误;(2)可以对密码子进行优化,以提高基因的表达效率;由于每个物种偏爱的编码子不同,当异源蛋白在 E.coli 里表达时,有些蛋白很难得到高表达。如果将真核生物偏爱的密码子改为原核生物偏爱的密码子,就可以实现真核生物的基因的高效表达;(3)当只知道某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列时,也可以通过人工合成基因的方法进行克隆和表达;(4)可根据需要进行基因的定点突变以改造基因;(5)研究人员根据自己的意愿设计得到自然界中很难获得甚至不存在的基因。 上海吉玛全基因合成服务流程:1. 当客户提供DNA或者氨基酸序列或者基因ID号时,我们将根据客户的要求对提供的序列进行分析,为客户提供免费基因设计服务,最终序列经客户确认后作为基因合成的基本信息。根据最终序列的具体情况设计合成方案,通过业务员或技术员给客户做出报价。2. 与客户达成一致意见后,签订基因合成服务协议和保密合同,客户交纳相应预付款。预付款到账即为基因合成开始期限,我们将立即进行单链 Oligo 合成、DNA片段拼接等工作,然后把全长基因克隆于载体中,再通过DNA测序确认合成基因的正确性。3. 测序结果如果发现有错误位点,我们会采取相应的技术手段进行修复校对,保证整个序列的正确性。4. 提供实验结果:包括测序彩色峰图、含有目的基因的重组质粒及含该质粒的甘油菌等。上海吉玛全基因合成交货期限及收费标准: 基因全长(bp) 交货期限(工作日)价格(¥) ≤300 7-12 1000元 300-3,000 12-40 3 元/bp ≥3,000 每增加1Kb增加14个工作日 协商 特殊序列 协商 协商 上海吉玛全基因合成真核过表达载体类型:目录号产品名称 启动子荧光标签真核抗性原核抗性C05001pEX-1(pGCMV/MCS/EGFP/Neo)CMVEGFPNeoKanC05002pEX-2(pGCMV/MCS/IRES/EGFP/Neo)CMVEGFPNeoKanC05003pEX-3(pGCMV/MCS/Neo)CMV--