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流式细胞术检测细胞凋亡实验原理 细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸( PS )只分布于细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的 PS 由脂质膜内侧翻向外侧。 Annexin V 是一种广泛分布于真核细胞胞浆的钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与 PS 有很强的亲和力,故可结合凋亡早期细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸。常用荧光探针 FITC标记 Annexin V ,通过流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶( Propidium Iodide, PI )是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用,就可以定量检测处于的不同凋亡时期细胞。技术应用 细胞凋亡一直是人们研究的热点,细胞凋亡与临床病毒有密切的关系,这种关系不仅表现在凋亡及其机制的研究,阐明了一大类免疫病的发病机制,而且由此可以导致疾病新疗法的出现,通过检测药物、基因、或蛋白对细胞凋亡调控基因的影响,研究肿瘤防治、老年痴呆、艾滋病、自身免疫疾病、心肌梗塞等疾病的疗法。实验流程 实验结果 B3 作用于 MCF-7 细胞流式细胞仪凋亡检测分析
细胞凋亡-Annexin V实验原理:Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。在细胞发生凋亡时,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。由于在发生凋亡时,磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变,因此,与DNA碎片检测比较,使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻,所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用,来区分凋亡细胞(Annexin V /核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V /核酸染料 )。实验步骤: 1. 取Falcon试管,按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。 2. 使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1× Binding Buffer缓冲液制成1×106细胞/ml的悬液。 3. Falcon试管中加入100 μl细胞悬液。 4. 按以下体积加入Annexin V与核酸染料: 管号 名称 荧光标记Annexin V 核酸染料 1 阴性对照 - - 2 单阳1 AV-FITC - 3 单阳2 - PI 4 样本 AV-FITC PI 5. 轻轻混匀,室温(20°C ~25°C)避光处放置15分钟。 6. 使用Annexin V-Biotin试剂进行检测时: 1×Binding Buffer缓冲液洗细胞一次,去上清。 1×Binding Buffer缓冲液100μl溶解SAv-FITC试剂0.5μg,加入到细胞管中。 轻轻混匀。 加入5μl PI,室温(20-25°C)避光处放置15分钟。 7. 各试验管中分别加入1×Binding Buffer缓冲液400μl。 8. 1小时内上流式细胞仪测定结果。
干细胞的检测与鉴定1、克隆形成率 在细胞实验中克隆形成率是评鉴细胞增殖能力的重要指标,如iPS诱导过程中克隆形成率是判定诱导效率的主要指标。麒盟生物能为客户提供贴壁细胞、悬浮细胞的克隆形成率实验。2、生长曲线 生长曲线是细胞增殖的经典检测方式,是细胞重要的生理指标,在许多高质量的文献中仍然有较高的采用率。然而,生长曲线的绘制实验费时、费力,若没有丰富的经验的良好的质量控制其结果也不可靠。麒盟生物能帮助客户解决生长曲线绘制的麻烦。3、核型分析 细胞染色体的数量和重组突变等在体外培养的细胞中时长发生,染色体数量的变化和片段的突变往往使干细胞研究的结果发生偏差,甚至产生错误。干细胞核型分析在许多高质量的干细胞文献中也作为质量控制的重要指标。4、形态学鉴定 干细胞鉴定主要从形态学和功能学两方面来实现。形态学方面的鉴定包括细胞的显微形态、表面标记分析(FACS)、免疫细胞化学、免疫荧光、化学染色等。麒盟生物课提供多种干细胞的FACS和其他形态学分析。5、成骨诱导分化 成骨分化是MSC必不可少的功能性鉴定指标,然而其诱导周期长,注意事项繁多,对经验相对缺乏的操作人员来说时间的浪费是最容易出现的问题。 麒盟生物具有丰富的MSC成骨诱导经验和完善的操作程序,可为客户提供成骨诱导分化的优质服务。6、成脂诱导分化 成脂诱导分化也是MSC功能性指标之一,在MSC鉴定中不可或缺。麒盟生物凭借丰富的MSC培养和诱导经验,用稳定的操作程序保证为客户提供可靠的成脂诱导服务。7、三胚层分化实验 三胚层分化能力是ES和iPS的必备指标。体外可以通过拟胚体(EB)形成来验证,体内可以通过裸鼠畸胎瘤麒盟生物能为客户提供体外和体内实验来验证细胞的三胚层分化能力。麒盟生物旨在做 最好的医学科研助手,选择麒盟,助您成功 。
原位杂交属于固相分子杂交的范畴,它是用标记的DNA或RNA为探针,在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同,原位杂交可分为DNA-DNA杂交,DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交三类。原位杂交或荧光原位杂交技术能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受组织成分的影响,因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便;同时由于原位杂交不需要从组织中提取核酸,对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性,并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确直接地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。技术应用原位杂交优点在与高度特异性,它可测定组织、培养的单个细胞或细胞提取物中的核苷酸含量。实验流程样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→显示→荧光显微镜检测→结果分析实验结果
公司提供qPCR检测服务,内容包括引物设计、RNA(mRNA、lncRNA、microRNA)抽提、反转录、qPCR检测和数据整理,价格根据材料(组织或细胞)、RNA类型、数量等不同项目具有不同的价格。具体价格请电话或邮件咨询,我们将努力让您得到满意的结果。基因表达检测实验原理荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程。随着PCR反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,它的出现使得基因表达定量检测更加简便、精确。相对定量是检测基因表达量变化最常用的方法之一。主要用于测定一个待测样本中目标核酸序列与校正样本中同一序列表达的相对变化。可采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式,一般采用2-ΔΔCt法进行计算。技术应用本技术主要用于不同药物处理的样本、病理组样本&对照组样本、相同基因在不同组织部位等基因表达差异。实验流程 实验结果