服务简介

泛素化蛋白经胰酶消化后，在包含泛素化的赖氨酸会保留有二甘氨酸标签，利用二甘氨酸（diGG）抗体可特异性地富集肽样品中泛素化修饰肽片段，并对富集后的泛素化肽进行液相色谱-串联质谱检测。

应用领域：

1.不同实验条件下泛素化蛋白质组的定量比较

2.筛选特定E3泛素连接酶的底物

技术优点：

1.样品经胰酶消化、diGG抗体富集后，可鉴定特异性达90%的泛素化肽；

2.90分钟的液相色谱-质谱分析可鉴定2000泛素化肽。

可选仪器：

QExactive HF、Orbitrap Fusion

分析流程

样品经Trypsin 酶切，酶切产物脱盐后与

diGG抗体孵育，经diGG抗体富集洗脱并脱

盐后进行液相色谱-串联质谱分析，并采用

由Mascot等软件对质谱数据检索。

可选数据分析

1.泛素化肽的鉴定及定量；

2.泛素化肽及蛋白的GO分析及差异蛋白GO分析；

3.泛素化肽及蛋白的Pathway通路分析及差异蛋

  白的Pathway通路分析；

4.重复性分析（仅针对有重复设计的项目）；

5.多样品间表达模式聚类分析（适用于样本

  数≥3的项目）。

样品要求

蛋白提取物：≥5mg

细胞：≥10⁸

组织：动物组织≥100mg,植物组织≥100 mg

体液：血清≥20μL，脑脊液≥30μL

参考文献

1. GuoqiangXu, Jeremy S Paige, and Samie R Jaffrey.Global analysis of lysine ubiquitination by ubiquitin remnant immunoaffinity profiling. Nat Biotechnol. 2010 Aug; 28(8): 868–873.