吉玛全程服务

用户提供整体实验方案，吉玛通过评估客户需求，围绕公司特色，结合现有平台及扩展平台，利用分子细胞生物学技术，提供真实实验数据，完成客户外包试验。

用户提供整体实验方案，吉玛通过评估客户需求，围绕公司特色，结合现有平台及扩展平台，利用分子细胞生物学技术，提供真实试验数据，完成客户外包试验。

1、筛选有效的干扰片段或病毒

1.1 摸索细胞最佳转染或侵染条件

荧光蛋白指示转染效率（一般达70%以上）

1.2 RT-PCR
1.2.1 RNA提取质量检测电泳图

1.2.2 RT-PCR扩增曲线示例（三重复避免系统误差）

1.2.3 RT-PCR数据分析示例（计算组内误差）

1.2.4 RT-PCR结果柱状图示例（检测干扰效率）

1.2.5 靶基因与内参溶解曲线图（检测扩增质量）

1.2.6 DNA片段扩增质量检测电泳图

1.3 Western Blot

1.3.1 蛋白电泳图

1.3.2 灰度分析图

2、双荧光素酶系统检测siRNA,microRNA有效性

2.1 载体信息及工作原理（基于Promega系统），miRNA靶基因预测双荧光素酶报告系统：吉玛采用promega的psicheck2.0载体系统构建靶基因3‘UTR系统。该系统可检测siRNA/miRNA与靶基因的调控关系，报告荧光（hRluc)验证si/miRNA调控作用，校正荧光（hluc)检测质粒表达效率。另外客户还可选择构建突变UTR系统。具体价格敬请来电咨询。
2.2 载体设计及结果（利用psiCheck2.0 Luciferase载体构建，选取已验证的miR-21靶标基因PDCD4 3’-UTR做靶点，分析不同mir21的修饰对靶点结合的影响）

3、进行下游细胞实验

3.1 下游靶基因表达量的鉴定

常规出示的结果同样包括：RT-PCR、Western，如果涉及分泌蛋白，可以进行Elisa实验，客户可指定检测方法

3.2 稳定株筛选实验

在药物压力下筛选稳定表达细胞株，常规出示结果包括：RT-PCR、Western，客户可指定筛选及检测方法。实验过程：1.抗生素筛选浓度确定（致死曲线）：2. 细胞接种：转染实验前天接种细胞。转染时细胞密度达到60%~80%；3. 细胞转染（脂质体）或侵染（慢病毒）4. 利用质粒抗性筛选稳定干扰细胞株；5. 目的基因干扰效果验证。周期2-3个月，提供T25稳筛细胞株一瓶，具体价格敬请来电咨询。

3.3 克隆形成率实验

采用结晶紫或吉姆萨染色法，检测转入靶基因后细胞增殖情况，常规出示结果包括：克隆染色图及柱状分析图

3.4 细胞增殖实验

采用CCK8或MTT方法，检测细胞增殖的情况，使用CCK-8方法：据活细胞线粒体内的脱氢酶可将试剂中的有效成分转变为有颜色的Formazan，并可被酶标仪检测，间接反应活细胞数量。具体价格敬请来电咨询。（包括4组细胞，每个样品3-5个复孔，客户可以选择检测时间点。）

常规出示结果包括：

3.4.1 原始读数（每个样品5个重复）

3.4.2 细胞增殖曲线图

3.5 细胞周期实验

采用PI染色的方法，在流式细胞仪上对细胞样品进行细胞周期分析

3.6 细胞凋亡的分析

采用Annexin V / PI ； Annexin V-PE /7-AAD或客户自己提供合适的试剂盒，在流式细胞仪上对细胞样品进行细胞。

3.7 细胞迁移实验（Transwell）

采用结晶紫或DAPI染色法，检测细胞迁移的能力。或用CKK-8法进行检测。客户需提供：检测细胞及其培养条件和处理方法。选择观察时间点。

3.8 细胞侵袭实验（Transwell+ Matrigel Basement Membrane Matrix）

采用结晶紫或DAPI染色法，检测细胞侵袭的能力，铺有Matrigel的特殊滤膜，正常细胞不能自由穿过。在下室中加入趋化剂，上室加有经过处理的重悬肿瘤细胞，具有侵袭能力的肿瘤细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动，并粘附在滤膜下表面。具体价格敬请来电咨询。

3.9 细胞划痕实验

通过对划痕部位距离差异的计算，检测细胞迁移能力

3.10 Confocol实验：

通过融合荧光蛋白或荧光二抗，鉴定目标蛋白细胞内定位，利用抗原－抗体特异性结合的原理，用经荧光染料标记的抗体对细胞内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。流程：细胞爬片转染或药物处理固定透化封闭一抗孵育荧光二抗孵育荧光显微镜观察拍照。客户需要提供荧光一抗及二抗，具体价格敬请来电咨询。

       3.11  粘附实验部分：

               本平台是借助CCK8试剂盒可以检测活细胞的功能，检测不同处理组间的粘附差异。

       3.12  酶联吸附实验（ELISA) 4步骤帮您轻松检验各种蛋白大分子抗原：

              （1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。（2）加受检标本，保温反应，去除未结合物质。（3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫标抗体结合。（4）加底物显色。服务价格：检测3-5组样品，每组样品3个复孔，具体价格敬请来电咨询。