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服务简介
miRNA质粒载体
MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控(如右图所示)。GenePharma MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA,经过Drosha(RNaseⅢ)作用形成small hairpin pre-miRNAs(约70nt),再过Dicer作用形成成熟的microRNA(约22nt),作用靶mRNA,起到表达调控作用。
MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控(如右图所示)。GenePharma MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA,经过Drosha(RNaseⅢ)作用形成small hairpin pre-miRNAs(约70nt),再过Dicer作用形成成熟的microRNA(约22nt),作用靶mRNA,起到表达调控作用。
microRNA过表达载体
吉玛提供两种过表达的方式:
1. 从天然的基因组序列中表达pre-miRNA转录本构建pre-microRNA。插入序列不仅包含pre-miRNA茎环结构,同时构建100-200bp长的上下游两端的侧翼序列。使用使用pol-Ⅱ(如CMV)启动子,这种构建方式保证高水平的表达pre-microRNA。表达出来的pre-miRNA的生理活动尽可能接近天然状态。
使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型(如吉玛pEX系列 M核过表达载体ﻉ,我们完成序列合成,质粒构建。
目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 交货期限 |
C08001 | 质粒型microRNA 过表达载体-1 (pre-miRNA+flanking sequences, ~500bp) | 50μg | ¥2,500 | 3-4周 |
2. 利用吉玛优化过的载体,模拟内源miRNA-155的表达模块,这种构建方法解决了不同miRNA表达效率差异的问题,同时也有效的避免了有些内源miRNA表达时产生-3p,-5p的问题。miRNA的发夹序列融合在EGFP报告基因的后面,模拟miRNA在体内的成熟过程。
GenePharma microRNA载体元件信息及用途 | |
特征 | 用途 |
CMV promoter | 高表达目的基因 |
EmGFP | 利用荧光显微镜观察转染效果 |
Blasticidin resistance gene | 可用来筛选稳定细胞系 |
Spectinomycin | 筛选含有已经转化质粒的E. coli |
pUC origin | 质粒可以在E. coli中进行高拷贝 |
使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息,我们完成序列合成,质粒构建。
目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 交货期限 |
C08002 | 质粒型microRNA 过表达载体-2 (pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin) | 50μg | ¥1,000 | 2-3周 |
microRNA抑制子表达载体
吉玛提供两种miRNA抑制子载体构建的方式:
1. ;)PAN>利用吉玛优化过的载体,模拟内源miRNA-155的表达模块,来表达miRNA inhibitor序列。这种构建与吉玛miRNA过表达方式2使用同样的载体系统,方便客户使用同一套系统完成miRNA的过表达与抑制。
使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息,我们完成序列合成,质粒构建。
目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 交货期限 |
C08003 | 质粒型microRNA 抑制子载体-1 (pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin) | 50μg | ¥1,000 | 2-3周 |
2. miRNA sponge(海绵)载体构建:吉玛通过构建载体,表达包含多个成熟miRNA结合位点的RNA序列,通过吸附结合成熟miRNA,从而抑制miRNA的作用,从而进行功能缺失性研究。
miRNA sponge的特点:
a. 由于miR Sponges是由质粒编码的,它能够通过真核表达载体或包装慢病毒颗粒达到稳定沉默细胞microRNA的目的;
b. 能够沉默整个家族的microRNA以达到对整个家族microRNA功能的研究;
c. 可以利用miR Sponges实现体内外loss of function研究;
d. 可以用来检测luciferase靶基因报告系统分析;
e. 可以自由组合串联不同miRNA抑制子序列,达到沉默多种不同miRNA的目的。
使用这种构建方式,客户需提供miRNA的具体信息、预构建miRNA inhibitor的重复数及预构建inhibitor的序列信息,我们完成序列合成,质粒构建。
目录号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 交货期限 |
C08004 | 质粒型microRNA 抑制子载体-2 (microRNA inhibitor sponge, 3重复) | 50μg | ¥1,500 | 3周 |
microRNA靶基因荧光素酶报告载体
吉玛采用Promega的psicheck2.0的载体系统完成靶基因3’ UTR质粒载体构建服务。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR构建。
psicheck2.0报告基因检测系统用来检测siRNA/miRNA与靶基因是否可能存在调控作用,该报告系统报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR区域,通过对该荧光的监测,即可验证siRNA/miRNA对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参,用于监测质粒表达效率。
严格的实验体系,要求miRNA与mRNA 3’ UTR验证实验中需要构建靶mRNA的点突变载体,以验证靶点作用有效性。突变载体构建主要依据预测的miRNA与靶基因3’UTR的稳定结合区域(即种子区)。通过种子区全部碱基或部分碱基突变导致miRNA与靶基因3’UTR区域的结合能力大大降低,从而判断是否存在miRNA的调控作用。
完成miRNA靶基因报告基因载体构建,需要客户提供:miRNA具体信息,预测靶基因信息,miRNA与靶mRNA结合位点信息。
目录号 | 产品名称
服务详情 |