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DNA甲基化检测服务

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地 址:北京

周 期:

服务简介

服务详情

一、背景介绍:
    
DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关,比如在肿瘤发生时,抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加,CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态,导致抑癌基因表达的下降。阅微基因通过以下方法提供甲基化检测服务:

 


服务编号服务项目介绍周期
DME01MSP法 甲基化特异性PCR方法定性检测特定
甲基化位点
1-2周
DME02BSP-克隆测序法 扩增产物克隆后测序,检测甲基化序列2-4周
DME03HRM法检测 高分辨溶解曲线方法检测甲基化程度1-2周
DME04引物设计与合成 设计用于MSP或BSP的引物1-2周


 
二、服务项目:
1.甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。

2.亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法。

3.高分辨率熔解曲线法(High Resolution Melting,HRM)
在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物,这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化,用亚硫酸氢盐处理后,未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,样品中的GC含量发生改变,从而导致熔解温度的变化(图1)。



 

图1 不同甲基化程度的样品(0%到100%)的HRM标准曲线

 

三、 送样要求:
细胞(≥106 个)、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等样品材料,基因组DNA(体积≥20μl,浓度≥50 ng/μl)。

四、提供结果:

 

服务编号内容
DME01 引物序列、实验报告、包括MSP产物的电泳图片
DME02 引物序列、测序峰图、阳性克隆质粒和实验报告
DME03 扩增曲线、熔解曲线及实验报告


五、相关产品

 

相关产品
名称品牌规格说明
 DNA连接系统Microread20/50/100次 高效,操作简便
 热启动Taq酶Microread250/500/1000U,
2.5U/μl
 化学修饰,热启动,特异性极好, 性价比很高
 基因组DNA提取试剂盒Microread50/100次 离心柱型,纯度更高

 

 


六﹑成功案例


    中国农业大学300个样品的BSP-克隆测序检测;中国农业科学院蔬菜花卉研究所500个样品的BSP-克隆测序检测;中国疾病预防控制中心1000个样品的BSP-克隆测序检测;及北京协和医院、北京朝阳医院、哈尔滨医科大学、第三军医大学、山东大学、广东医学院、天津总医院、宁夏医科大学等等。


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