服务简介

关键词：腺相关病毒，AAV，基因导入，病毒载体

腺相关病毒AAV简介

腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低产出，(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5)，排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中，rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外，有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。 

一、腺相关病毒（AAV）载体

广泛用于体内实验研究（定点注射与整体注射）

表达稳定高效；非整合，转基因安全性高

CMV, EF1a, CAG，GBG, Syn 等启动子可选

EGFP、mCherry等荧光蛋白可选

二、腺相关病毒（AAV）干扰载体

广泛用于体内实验研究（定点注射与整体注射）

表达稳定高效；非整合，转基因安全性高

构建快捷，序列保证准确

标记基因可采用EF1a或GBG启动子表达，稳定高效

三、腺相关病毒包装与纯化  

腺相关病毒包装采用三质粒系统进行包装，共转染后通过对细胞裂解物进行密度梯度离心纯化和收集病毒。

四、腺相关病毒滴度检测

检测方法：定量PCR检测病毒基因组中的外源DNA拷贝数

实验原理：腺相关病毒的基因组为单链DNA

五、腺相关病毒感染细胞

对于特定细胞有较高的感染率，如心肌和血管内皮细胞

感染温和，表达稳定长效

rAAV定位注射脑皮层区域进行基因沉默 Nature medicine, 2013, 19(6): 773-777.

六、腺相关病毒定位注射

感染范围广，可以用于神经系统、眼睛、心肌、肝脏、肌肉和肺部定位注射或定向给药

滴度高，颗粒小，扩散能力强

表达稳定，可持续半年以上

外源基因定向重组，免疫原性低，极少发生非特异反应和免疫抑制，适合于进行基因治疗研究