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刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠肝炎模型

      刀豆蛋白A(Con A)是一种被广泛应用可活化 T 细胞的有丝分裂原，依赖于辅助性T淋巴细胞(Th)及巨噬细胞发挥效应，ConA活化T淋巴细胞，刺激Th细胞及巨噬细胞产生TNF -α和IFN Y等细胞因子。TNF -α可直接损伤肝细胞，导致肝细胞凋亡。Con A诱导的小鼠肝损伤实验动物模型， 其病理特点主要是通过活化 T 淋巴细胞而致免疫性肝损伤。 Con A 静脉注射小鼠体内后，大部分在肝脏内聚集，表明肝脏是Con A 体内诱导毒性的靶器官。在病毒性肝炎的炎症发生过程中，淋巴细胞介导的细胞毒作用是导致病毒感染肝实质细胞溶解的主要免疫机理，而淋巴细胞与抗原递呈细胞及产生抗原的靶细胞间的粘附，是免疫反应过程所必需的重要步骤.

1.实验动物
 SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为8w-10w，体重为30g-35g。

2.实验分组
 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.主要试剂
 刀豆蛋白A

4.实验周期
  6h

5.建模方法
 ConA诱导小鼠肝损伤模型的建立：ConA溶于0.01 mol/L PBS，配成浓度为4mg/ml，以20mg/kg的剂量自小鼠尾静脉注射1次，在6 h处死小鼠，同时设立PBS尾静脉注射的PBS对照组。所有小鼠标准饲料饲养， 自由摄食及饮水。

6.模型的评价
  6.1 ConA诱导免疫性肝损伤小鼠ALT、AST及MPO的影响：
  术后6h，摘眼球取血，室温静止2h， 4℃离心机3000r/min离心10min，分离出上层血清，置-80℃冰箱保存备用。与正常组比较，模型组血清ALT、AST及MPO均明显升高。
  6.2 ConA诱导免疫性肝损伤小鼠肝脏组织学的影响
  取一肝叶，以4%多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，观察病理学改变。正常组肝小叶结构完整，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列。模型组肝细胞索排列紊乱，肝窦淤血较普遍，肝小叶内大多数肝细胞肿胀，肝组织可见汇管区纤维间隔形成，可见明显的点状坏死和灶状坏死，坏死灶内可见大量中性粒细胞，淋巴细胞和单核细胞浸润，广泛肝细胞嗜酸性变、空泡变、脂肪变。
  6.3 细胞因子的检测
  肝脏损伤后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高，可以用ELISA 法检测。

图1 正常小鼠。肝细胞以中央静脉为中心呈放射性排列(HE染色)

 
图2 刀豆蛋白肝损伤小鼠。中央静脉周围肝细胞空泡样变性，炎症细胞浸润(HE染色)