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蛋白质等电点测定

  • 蛋白质等电点
  • 等电点测定

价格: 1,000元/样品

地 址:上海

周 期:2周

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服务简介

样品要求蛋白纯度>90%,蛋白量>200ug,液体或冻干粉,浓度≥1mg/ml
实验原理两性电解质是人工合成的含有多羟基和多羧基的一组同系物,在高压电场的作用下会形成均匀的pH梯度,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯 度中电泳,泳动到特定的pH位置时便停止,正负电荷相等而呈电中性,从而可将多肽蛋白质根据等电点分离开来并测定其等电点。

实验仪器:1) Mμltiphor Ⅱ Electrophoresis System,GE Healthcare; 2) EPS 3501 XL Power Supply,GE-healthcare; 3) PowerLook 2100XL,UMAX

实验试剂1) 3-10 IEF Standard(161-0310,Bio-Rad) ;2) 2.5-6.5 IEF Standard(17-0472-01,GE) ;3) 两性电解质2-6(4294402,Serva) ;4) 两性电解质3-10(161-1112,Biolyte Ampholyte) ;5) 丙烯酰胺(161-0103,Bio-Rad) ;6) 亚甲基双丙烯酰胺(161-0201,Bio-Rad) ;7) N,N,N',N'-四甲基乙二胺(161-0801,Bio-Rad) ;8) 过硫酸胺(161-0700,Bio-Rad) ;9) 氢氧化钠(10019718,国药集团化学试剂有限公司) ;10)磷酸(10015418,国药集团化学试剂有限公司)

实验方法:

1) 样品处理:可对样品进行超滤脱盐处理,根据样品相对分子质量大小,选用适当的超滤管超滤浓缩,再以1%甘氨酸进行置换超滤清洗,重复三次后反超可得测试样品。

2)等电聚焦电泳:

预电泳:将电极对准电极条中心,加盖,开启外循环冷却系统,将温度设置成15℃。打开电泳电源,将电压设置成700V,电流上限50mA,功率上限为每1cm凝胶1W,开始预电泳,时间为20分钟。正式电泳:预电泳结束后,添加样品和对应的标准品至上样孔,按照电压500V,电流50mA,功率为每1cm凝胶1W的电泳条件,电泳20分钟,之后设置电压2000V,电流50mA,功率为每1cm凝胶1W,再电泳90分钟 。

3) 固定染色:

电泳结束后将凝胶支持膜从电泳槽中取出浸入固定液中,至少30分钟后转移到染色液中染色,至少30分钟后再转移到脱色液中脱色,直至凝胶背景清晰。

4) 图像扫描及分析:

待凝胶背景清晰后转移至扫描仪进行图像扫描,之后用ImageQuant TL Version 7.0软件分析样品的等电点。 


服务详情

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