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样品要求：蛋白纯度＞90%，蛋白量＞300ug，液体或冻干粉，浓度≥1mg/ml

实验仪器：

1) 高效液相色谱仪1200，安捷伦

实验试剂：

1) 标准品：胰岛素(猪)成分标准物质(GBW09816，中国计量科学研究院)

2) 三氟乙酸(T6508，Sigma)

3) 乙腈(34851，Sigma)

4)   0.22μm 超滤管(8161，Costar)

5)   C8 反相柱（Agilent，ZORBAX 300SB-C8）37% Acetonitrile Solution（S4B）(014-13831 Wako)

实验原理：蛋白质样品通过高效液相色谱分析，结果利用峰面积归一法计算得出度百分比。

实验方法：

1) 样品处理：

样品先用紫外分光光度计测试浓度，然后将样品的pH 值调至3 左右。将样品转移至0.22μm滤膜过滤，12000g 离心5 分钟，之后取样品100μg 上机测试。PVDF膜样品处理：

2) 高效液相色谱测试：

处理好的样品通过安捷伦高效液相色谱仪1200 分离检测。

相关参数如下：A 液为0.1% TFA 水溶液，B 液为0.1%TFA 乙腈溶液。流速为：1.0ml/min；柱温：30℃；色谱柱以3%的B 液平衡后，样品由自动进样器上样进入C8 反相柱（Agilent，ZORBAX 300SB-C8），运行上样程序(3% B 液洗脱维持25 分钟)，之后运行洗脱程序，梯度洗脱为70 分钟(A 液从97%~30%，B 液从3%~70%)，检测波长为280nm。

3) 高效液相色谱数据处理：

高效液相色谱仪1200 产生的原始数据由仪器自带软件ChemStationTM进行自动积分标峰处理，并保存。