服务简介

样品要求：

1)近紫外：纯度＞90%，蛋白量500-600ug，浓度≥1mg/ml

2)近紫外：纯度＞90%，蛋白量2500-3400ug，浓度≥1mg/ml

实验仪器：JASCO 715，JASCO

实验原理:

圆二色谱扫描就是利用蛋白质的圆二色性及不对称分子对左右圆偏振光吸收的不同来进行结构分析。

蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的具有特定结构的生物大分子。在蛋白质或多肽中主要的光活性集团是肽链骨架中的肽键、芳香氨基酸残基及二硫键等。当平面圆偏振光的吸收不相同，产生吸收差值。由于这种吸收差的存在，造成了偏振光矢量的振幅差，圆偏振光变成了椭圆偏振光，这就是蛋白质的圆二色性。

2)紫外线扫描

2.1）20mM PB扫描

将样品杯用2M HNO3浸泡过夜，去离子水冲洗干净后晾干，加入20mM PB

350μl，按照以上参数进行190-250nm的远紫外扫描并采集数据。

2.2）清洗样品杯后晾干，分别加入浓度为0.2mg/ml的样品按照上述参数进行190-250nm的远紫外扫描并采集数据。

3）近紫外扫描

3.1）20mM PB扫描

将样品杯用2M HNO3浸泡过夜，去离子水冲洗干净后晾干，加入20mM PB 1000ul，按照以上参数进行340-250nm的近紫外扫描并采集数据。

3.2）清洗样品杯后晾干，分别加入浓度为1mg/ml的样品按照上述参数进行340-250nm的近紫外扫描并采集数据。

3.3)  测试样品：

在正离子模式下选择线性方法测试样品分子量。

4）扫描图谱处理

对扫描后的所有图谱用软件Jwstda32进行smoothing处理。