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IP/CoIP/Pull-Down蛋白质鉴定

  • 蛋白质鉴定

价格: 1,600元/样品

地 址:北京

周 期:2-4周

服务简介

如何对互作蛋白进行鉴定是生物学研究中一项重要内容。本公司采用Thermo Fisher的LC-MS/MS在线联用系统对样本进行检测,与传统的蛋白质鉴定中经常用到的MALDI-TOF质谱系统相比,该方法灵敏度更高、蛋白肽段覆盖率更高、结果更可靠。该类样本的检测中经常碰到非特异性结合蛋白的问题,我们同时采用蛋白质定量手段来去除非特异性结合蛋白,非特异性结合蛋白在阳性与阴性对照样本中的定量比值接近于1,而真实的目标蛋白其含量在阳性对照样本中会显著高于阴性样本,通过该方法,我们能够可靠的鉴定到真实的相互作用蛋白。

服务详情

实验流程

使用蛋白酶将蛋白质酶切为肽段混合物,经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分,进入高分辨质谱仪进行分析,使用检索软件根据MS2谱图信息与数据库进行比对,并使用国际主流的正反库搜库策略对假阳性结果进行过滤,最后得到可靠的肽段鉴定结果,进而得到蛋白质鉴定结果。同时对每个蛋白质鉴定到的特征性肽段色谱峰峰面积进行统计,以色谱峰面积作为蛋白质的丰度表征,进而对阳性样本与阴性样本蛋白质的丰度进行比较,丰度比值为1的,为非特异性结合蛋白,阳性样本中丰度显著高于阴性样本的为真实的可靠的互作蛋白。

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样品要求

1.银染、考染的样本不需要脱色;
2.样本低温寄送;
3.溶液样本须告知溶液组成;
4.溶液样本需告知蛋白总量;
5.跑胶的样本在制备时必须佩带手套、口罩、帽子、白大褂以避免自身角蛋白的污染;
6.使用阴性对照样本去除假阳性鉴定结果的实验,整个实验必须保证阳性与阴性样本前处理IP、富集等条件完全一致。

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交付结果

1.括实验流程;
2.前处理基本方法
3.LC-MS/MS参数
4.蛋白质鉴定结果列表

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