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地 址:北京
周 期:4-5
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服务简介
实验流程
1.各个样品首先分别进行等量酶切;
2.每一个酶切得到的肽段样品选择一种标记试剂进行标记反应(每一个肽段至少含有一个游离的氨基进行反应);
3.将经过不同标记的肽段样品混合后进行后续的质谱分析。来自不同样品的同一肽段经iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数,并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后,在二级质谱检测(MS2)中,不同的报告基团被释放,它们各自的质谱峰的信号强弱,代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低;
4.检测得到的结果使用软件进行检索分析。软件根据MS2谱图的信息,并结合经典的正反库搜库策略对MS2谱图进行解析,得到肽段鉴定结果,进而得到蛋白质鉴定结果,同时软件还对各个蛋白质的特征性肽段的报告离子强度信息进行统计,以报告离子强度作为肽段的丰度表征,进而得出蛋白质的丰度值,最终得到样本间蛋白质的相对丰度比值。
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样品要求
1.各个样本蛋白质总量在100ug以上;
2.样本来源:体液样本,组织样本,植物样本,微生物样本。。。
3.溶液样本须告知详细的溶液组成;
4.如自行酶解蛋白样本需详细沟通酶解过程;
5.请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
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交付结果
1.实验流程;
2.前处理基本方法;
3.LC-MS/MS参数;
4.蛋白质定性、定量结果列表;
5.差异蛋白筛选列表;
6.生物信息学分析:GO注释,KEGG通路分析、蛋白质相互作用网络图分析。
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