基于MS3定量的iTRAQ/TMT的蛋白质标记定量技术

  • 基于三级定量的iTRAQ/TMT的蛋白质

价格: 4,500元/样品

地 址:北京

周 期:4-5周

服务简介

传统的基于MS2定量的iTRAQ/TMT的蛋白质标记定量技术质谱在进行定量时易受到背景干扰,导 致定量准确性降低(nature methods | VOL.8 NO.11 | NOVEMBER 2011 | 937),而基于Orbitrap Fusion Lumos质谱仪的同步母离子筛选技术的MS3标记定量技术则可以有效改善 iTRAQ/TMT定量结果的准确性,为客户提供高准确度的蛋白质定量结果。

服务详情

实验流程

不同组的样品首先分别进行等量酶切,每一个酶切得到的肽段样品选择一种标记试剂进行标记反应(每一个肽段至少含有一个游离的氨基进行反应);然后将经过不同标记的肽段样品混合后进行后续的质谱分析。来自不同样品的同一肽段经iTRAQ/TMT试剂标记后具有相同的质量数,并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行CID碎裂后,采集的二级(MS2)谱图被用于蛋白质定性分析,同时该谱图中强度最高的5-10个离子可以同时被筛选出来使用HCD进行碎裂,并采集碎裂后的三级质谱图,在三级(MS3)谱图中,不同的报告基团被释放,它们各自的质谱峰的信号强弱,代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。

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样品要求

1.各个样本蛋白质总量在100ug以上;
2.溶液样本须告知详细的溶液组成;
3.如自行酶解蛋白样本需详细沟通酶解过程;
4.请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。

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交付结果

1.实验流程;
2.前处理基本方法;
3.LC-MS/MS参数;
4.蛋白质定性、定量结果列表;
5.差异蛋白筛选列表;
6.生物信息学分析:GO注释,KEGG通路分析、蛋白质相互作用网络图分析。


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