服务简介

实验流程

（1）从样本中提取蛋白并用BCA法或Brandford法进行蛋白的浓度测定；

（2）SDS-PAGE检测蛋白质完整度；

（3）每个样品取等量蛋白质进行酶解；

（4）对酶解后的肽段使用反向色谱柱，进行组分分离；

（5）加入混合标肽段（保留时间校正）；

（6）酶解后的多肽进行DDA建库，并对DDA建立库数据整理。。

（5）使用DIA模板，进行液相色谱串联高分辨质谱（LC-Orbitrap MS）采集，获得高质量DIA数据。

（6）对DIA数据进行处理，得到可信蛋白、筛选差异表达蛋白、差异蛋白生物信息学分析。

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交付结果

34D

小鹿智囊

① DIA技术有什么优势？

答：肽段覆盖率高、定量准确度高、实验重复性好；DIA技术的蛋白定量是基于二级质谱定量，相对于传统的Labelfree技术来说定量准确度更高；对比ITRAQ/TMT技术，DIA技术没有通量限制，可以同时对大样本量样品进行定性定量比较；DIA技术更适合于大样本量、复杂体系的蛋白检测；DIA技术不需要昂贵的标记试剂，同时克服了标记效率对定量的影响；

② DIA技术需要做技术重复么？ 

答：DIA技术需要至少三次生物学重复，特别是临床样本，重复越多越好。

③DIA技术为什么需要重新建库，NCBI和uniport的数据库不能用么？

答：DIA本身是一种扫描的方式，我们常用的技术比如itraq/TMT、Labelfree等都是基于DDA的扫描方式，而且目前的数据库也只适合DDA扫描的出来的质谱数据，所以我们只能人工的建立一个数据库，才能供DIA的数据进行识别。

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DIA服务流程