服务简介

标本要求：石蜡切片

EVG染色实验步骤

1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2、 染色：切片入Verhoeff's染液温室染15-30 min，至颜色呈深黑色。

3、 分化：自来水冲洗，2%三氯化铁溶液分化10-20s，显微镜观察弹性纤维呈黑色，背景呈灰色。

4、 清除多余碘：自来水洗，5%硫代硫酸钠处理1 min清除碘。

5、 复染：自来水洗，蒸馏水稍洗；Van Gieson's液复染3-5 min，无水乙醇洗。

6、 脱水封片：将切片依次放入无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

7、 显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果：弹性纤维和核为黑色，胶原纤维为红色，其他组织成分为黄色。

注意事项

1、分化程度要把握好，既要弹性纤维深蓝色至黑色，背景又不能太深。可用盐酸酒精进行分化，分化快也比较好控制，分化时可以让切片稍微过染不要分化过度，因为后续操作弹性纤维会有稍许掉色。如果弹性纤维着色较浅或分化过度，可以用盐酸酒精或2%三氯化铁彻底分色水洗后重新染Verhoeff's染液。盐酸酒精分化可以将背景分化很干净。三氯化铁分化数次后背景会加深不易分化掉。

2、有些组织如肝，心脏弹性纤维较少，主要观察组织内有弹性纤维的小动脉。如果没有弹性纤维的小动脉，注意染色结果为背景灰黄色，胶原纤维红色即可。

3、需要用梯度酒精脱水，否则组织上易出现脱水不净水珠的情况。解决办法：二甲苯浸泡去掉盖玻片后，二甲苯浸泡洗涤掉中性树胶，无水乙醇浸泡两道去除二甲苯，过95%-90%-75%梯度酒精各数分钟后，重新梯度酒精脱水封片。

4、复染VG的红色进水极易脱色注意控制时间，95%酒精内苦味酸的黄色极易脱掉，注意控制脱水时间不能太长。

5、EVG染色可以很好地显示如主动脉中较粗大的弹性纤维，但对于肺和皮肤中较细小的弹性纤维染色不好，而且分化程度不太好控制易分化过，背景灰黄色也较深。要解决后面三个问题可以优先考虑间苯二酚碱性品红法来染弹性纤维，不易分化过，基本无背景而且细小的弹性纤维清晰可见。

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