JK GREEN
实验介绍总RNA提取分离纯净、完整的RNA分子对于分子克隆的实验非常重要,而且是进行基因表达分析的基础。在总RNA中,75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA),其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA(small nuclear RNA,snRNA)及核仁小分子RNA(small nuceolar RNA,snoRNA)等组成。RNA提取与纯化技术是基因克隆、cDNA文库构建、蛋白质体外翻译、RNA序列分析及Northern Blot等技术所必需的,评价RNA质量的两个关键指标是其完整性和纯度。miRNA提取MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子,如小干扰RNAs (siRNAs),通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达,以预防通过各种机制的表达。 他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。采用miRNA分离纯化试剂盒可以从新鲜或冷冻组织、细胞中进行高效提取。基因组DNA提取制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究以及基因诊断的重要步骤,通常要求得到的片段长度不小于100~200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有10^7-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温冻存的组织细胞中提取,可采用传统方法,及在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现,也可用提取基因组DNA的试剂盒,该方法得到的DNA酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验。质粒抽提质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。按照产量可分为微量提取(微提)、中量提取(中提)、大量提取(大提),提取方法有一般提取(质粒粗提,如用于酶切鉴定)和试剂盒提取(质粒精提,如用于细胞转染)。服务流程客户提供● 活细胞或新鲜/冷冻组织样本● 质粒抽提请提供甘油菌或质粒及相关质粒信息(拷贝数、抗性等)● 采用试剂盒提取方法需购买相应试剂盒(可有我司代购)服务优势● 专业的复杂组织样本处理技艺● 标准化的核酸提取/纯化流程● 全套的定性定量实施方案● 提取核酸高浓度及纯度● 真实清晰完整的报告呈现
实验介绍基因克隆指发生在基因水平上的分子克隆(DNA克隆),即将编码某一多肽或蛋白质的基因(外源基因)组装到细菌质粒(克隆载体)中,再将该重组质粒转入大肠杆菌体内,使其随大肠杆菌增殖而进行复制。由于质粒具有不相容性,即同一类群的不同质粒不能在同一菌株内稳定共存,当细胞分裂时就会分别进入到不同的子代细胞,因此来源于一个菌株的质粒是一个分子克隆,而随质粒复制出的外源基因也就是一个分子克隆。DNA插入片段获得途径有逆转录-PCR、文库筛选、人工合成(适合小片段基因)。真核表达质粒构建将目的基因片段(1.cDNA文库;2.人工合成;3.PCR产物)通过合适的酶切位点构建到相应真核表达载体中,通过细胞转染的方式在真核宿主细胞内最终实现目的基因的表达。服务流程客户提供● 基因名称或序列号● 逆转录-PCR方法合成cDNA需要提供细胞或组织样本服务优势● 系统化的目的片段制备方案● 专业化的基因克隆平台● 高效的表达质粒构建流程● 真实清晰完整的报告呈现
实验介绍数字 PCR(Digital PCR或dPCR)作为传统实时定量 PCR 的替代方法,可以实现绝对定量及稀有等位基因的检测。 数字 PCR 的工作原理在于将 DNA 或 cDNA 样品分割到几十、几万个单独、平行的 PCR 反应(将样品稀释到单分子水平),这些反应中有的包括靶标分子(阳性),有的不包含(阴性)。 单个分子可以被扩增一百万倍或更多,数字PCR在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集,当不存在任何靶标序列时,没有信号累积,阴性反应片段用于生成样品中靶标分子的绝对计数。此方法的优点:1)不依赖于扩增曲线的循环数,不受扩增效率的影响;2)不需要内参基因;3)绝对定量不需要标准曲线;4)很好的准确性及重现性。基于上述优点,数字PCR被越来越多的用于分子生物学检测,如突变/稀有变异检测、拷贝数变异检测、肿瘤组织核酸分析、基因表达分析、线粒体拷贝数与突变分析,同时还可以用于NGS的结果验证。服务流程客户提供● 细胞样本:细胞悬液(≥10^6)或冻存团块● 组织样本:新鲜样本或液氮保存样本(≥300mg)● 血液样本:≥1ml● 核酸样品:DNA或RNA冻存样本(≥1μg,-80度保存6个月以内)● 基因名称或序列号服务优势● 高纯度的核酸提取技艺● 专业的特异性引物设计方案● 先进的数字PCR仪● 标准化的dPCR操作流程● 真实清晰完整的报告呈现
实验介绍实时荧光定量PCR(Real-Time qPCR)技术,通过荧光染料或荧光标记的特异性探针引物,对PCR产物进行标记,每扩增一次,荧光信号收集一次,荧光信号强度随反应产物不断累积,通过荧光强度的变化实现产物量变化的时时监测,经过与之相连的计算软件分析后,得到荧光扩增曲线,从而得出待测样本中初始模板的量。该技术可以用于核酸的相对定量和绝对定量(需要制备标准品并建立标准曲线,然后检测目的样本中的基因,比对标准曲线得到基因准确拷贝数)。服务流程客户提供● 细胞样本:细胞悬液(≥10^6)或冻存团块● 组织样本:新鲜样本或液氮保存样本(≥300mg)● 血液样本:≥1ml● 核酸样品:DNA或RNA冻存样本(≥1μg,-80度保存6个月以内)● 基因名称或序列号服务优势● 高纯度的核酸提取技艺● 专业的特异性引物设计方案● 先进的实时荧光定量PCR仪● 标准化的Real Time-qPCR操作流程● 真实清晰完整的报告呈现
实验介绍细胞黏附 细胞的黏附功能与胚胎发育和分化、正常组织结构的维持、炎症反应、免疫应答、凝血和血栓形成、创伤修复、肿瘤浸润与转移等多种生理和病理过程有关。细胞黏附能力的检测可以通过检测细胞与层粘连蛋白LN或 FN(两种常用的黏附分子,多数肿瘤细胞对此具有较强的黏附能力)的黏附能力来进行评估。此方法主要用于判定细胞在经过各种药物处理、基因转染、敲除或培养条件改变后,细胞的粘附能力改变情况。细胞迁移细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程,是活细胞普遍存在的一种运动形式,涉及胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等生理病理过程。常见的检测细胞迁移的方法有划痕修复法和Transwell 小室法。细胞侵袭细胞侵袭能力是衡量肿瘤细胞恶性程度的重要指标,细胞实现侵袭需要分泌可以降解胞外基质的酶。Transwell小室法的检测模拟细胞向胞外基质的侵袭,即细胞需要分泌水解酶,将小室内的Matrigel水解,才能进入下室,肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与体内侵袭转移能力表现出较好的相关性。细胞克隆形成此方法通常用于衡量细胞的transform水平及细胞的恶性程度,实验方法包括平板克隆和软琼脂克隆形成实验,前者适用于贴壁生长的细胞,后者适用于非锚着依赖性生长的细胞。服务流程客户提供● 生长期活跃的哺乳动物原代细胞或细胞系(无支原体污染)服务优势● 先进的显微拍摄技术● 丰富的哺乳动物细胞培养经验● 规范化的细胞、分子生物学检测体系● 真实清晰完整的报告呈现