1.急性分离或培养的神经元的电生理学检测 Ø 药物对急性分离或培养的皮层,海马,延髓等神经元的电压门控通道(Na,Ca或K通道等)或配体门控通道(GABA,NMDA,AMPA等)以及动作电位,自发性突触后电位等的作用及其机制研究Ø 脊髓背根神经节神经元的离子通道(如Na通道等)及动作电位的记录以及镇痛药物的筛选和机制研究Ø 药物对急性分离或培养的神经元蛋白表达/mRNA表达的影响机制研究Patch clamp on cultured cortical neurons or DRG neurons案例:急性分离成年大鼠海马神经元BKCa电流研究
脑片电生理学研究 (LTP, LTD,脑片膜片钳) Ø 红外可视脑片膜片钳脑或脊髓切片记录 Ø 药物对兴奋性或抑制性突触前或突触后活动的分析,包括快速(配体门控离子通道介导的)或慢速(如GPCR介导的)的突触活动记录 Ø 药物对细胞兴奋性作用的直接测定 细胞外记录,包括长时程增强(LTP)或长时程抑制(LTD)的研究。例如:海马脑片场电位记录 Example1: Effect of CpdA on AMPA receptors mediated miniature excitatory post synaptic currents(mEPSCs) in the visual cortex. Example2: Impairment of LTP in AD mice and rescued by A-drug in the CA1 area of hippocampal slices.
新药研发过程中,药物的致心律失常毒性越来越受到关注。FDA即将推出的新指导原则全面致心律失常的心脏安全性评价(CiPA)又会给心脏安全性评价带来怎样的变革。爱思普普已准备好CiPA相关的所有离子通道。1.hERG离子通道ChannelKV11.1,hERG,IKrCatalog Ref.ICE-HEK-hERGGeneKCNH2SourceshumanExpression systemHEK293Methodwhole cell patch clampReference InhibitorE4031, cisaprideTargetQT-prolongation, Torsade de Pointe(TdP) 2. Nav1.5离子通道ChannelNaV1.5GeneSCN5ACatalog Ref.ICE-HEK-Nav1.5SourceshumanExpression systemHEK293Methodwhole cell patch clampReference inhibitorTTX (1.0μM± 438.7nM)TargetBrugada syndrome, long QT syndrome, progressive cardiac conduction disease ,dilated cardiomyopathy, sick sinus syndrome, and atrial fibrillation3. Cav1.2 离子通道ChannelCav1.2/β2/α2/δ1, L-typeCatalog Ref.ICE-CHO-Cav1.2GeneCACNA1CSourceshumanExpression systemCHOMethodwhole cell patch clampReference InhibitorNifedipine(31.3nM±6.8nM), verapamilTargetTimothy syndrome, long QT syndrome, Pain, epilepsy, hypertension, stroke, arrhythmia, Autism 4. Iks离子通道ChannelKvLQT/minK, IKsGeneKCNQ1/KCNE1SourcesHumanCatalog ReferenceICE-HEK-IKsExpression systemHEK293Methodwhole cell patch clampStandard time2 weeksReference compoundChromanol 293B (1.5µM±0.171µM)TargetAtrial fibrillation
人类ether-a-go-go相关基因 (human ether-a-go-go-related gene, hERG)编码的快速激活延迟整流钾电流 (IKr) 是心肌细胞动作电位3期复极化的主要电流成分。药物相关的hERG 钾通道抑制能够引起心室延迟复极(长QT间期综合征),并可能引发尖端扭转室速等致命性心律失常,甚至猝死。近年多种非抗心律失常药物(如特非那丁terfenadine,阿斯咪唑astemizole等药物)被FDA撤除美国市场,主要原因其是其对hERG钾通道的抑制作用引发的致命性心律失常。为此, 2005年国际协调会 (theInternational Conference on Harmonisation,ICH) 颁布的指导原则S7B建议所有的药物均需要评估其对心肌延迟复极的作用,美国FDA及欧洲EMEA等药物监管部门也均要求新药申报必须有hERG心脏安全性的评价资料。我国药物的心脏毒性问题也越来越引起药物监管部门重视,并成为影响新药临床实验及上市的重要风险因素。因此,在新药物研发的早期即引入hERG检测,早期发现化合物的心脏毒性,可以避免进入临床研究或上市之后的昂贵的失败,从而有效地控制新药物研发中的风险及成本(在药物研发前期只需加入心肌细胞的动作电位的膜片钳检测,以验证药物是否有心脏毒性)。hERG钾通道相关的药物心脏安全性筛选服务就可以有效的降低药物开发中的风险,为项目早期推进提供可靠的依据,省去药物研发、药物临床实验/试验的不必要开支。 在所有先导化合物中,约有25-40%的化合物对hERG具有自然的抑制作用。我们的hERG钾通道相关的药物心脏安全性筛选服务汇集专业的电生理研究团队,每人都有丰富的电生理膜片钳检测的经验,通过以丰富的离子通道细胞库和先进的全自动膜片钳系统为您提供高质量,高效率以及低成本的hERG钾通道相关的心脏安全性筛选服务。 检测方法:Nanion Patchliner? 全自动膜片钳系统(德国)或手动膜片钳系统细胞系:hERG稳定表达的HEK293(法国CreacellTM)样品:通常4个剂量组(每组n≥3)+阳性对照组 (E4031, cisapride或terfenadine) + 溶剂对照组 (通常0.1% DMSO)质量标准:破膜前封接电阻>1000MΩ,整个实验中封接电阻>200MΩ溶媒对照组Rundown应小于1%/分钟。给药前电流需稳定5分钟以上。给药前电流幅度应大于300pA。整个实验中Rs应不大于10MΩ。观察指标:全细胞hERG钾电流阻断百分率,量效关系曲线,每种样品的IC50实验周期:5天 结果报告:标准英文或中文报告。 Kv11.1 (hERG) Channel KV11.1,hERG,IKr Gene KCNH2 Sources Human Catalog Reference ICE-HEK-hERG Expression system HEK293 Method whole cell patch clamp Standard time 2 weeks Reference compound E4031, cisapride Target QT-prolongation, Torsade de Pointe(TdP)