流式细胞周期检测实验原理 细胞周期(Cell Cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。 流式细胞仪PI染色法检测细胞周期的原理:由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期,S 期和G2/M 期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率 流式细胞周期检测实验流程 流式细胞周期检测实验结果展示
细胞凋亡(Cell apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下的损伤,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 细胞凋亡检测的方法很多,我们采用的Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的原理:磷脂酰丝氨酸(Phosphatidyl serine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行EGFP融合、荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针。实验流程实验结果展示
实验原理细胞迁移是指细胞在接收到内源或外源迁移信号后而产生的移动。细胞迁移是通过胞体形变进行的缓慢的定向移动,涉及细胞觅食、伤口痊愈、胚胎发生、免疫反应、感染和癌症转移等生理现象。因此通过对细胞迁移的研究,对阻止癌症转移、异体植皮等医学应用方面具有一定意义。细胞侵袭实验则是研究肿瘤细胞对基质膜消化后的迁移运动,肿瘤细胞须经血管基底膜穿入深面间质后才能侵袭组织和转移至远处。实验流程实验结果展示
应用领域肿瘤细胞增殖活性的检测目的基因瞬转/稳转细胞系的细胞增殖活性研究小分子化合物/多肽等药物筛选及功能安全性研究中药/中间体等药物筛选及功能安全性研究目的基因过表达的基因功能研究目的基因RNAi干扰的基因功能研究microRNA过表达/干扰的调控机制研究实验原理 CCK-8(Cell Counting kit-8)试剂中含有WST–8:化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan),生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,可采用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,间接反映活细胞数量。实验结果展示
在生物医学研究中建立的具有人类疾病模拟性表现的动物实验对象和材料。人类疾病的发生、发展是一个复杂过程,以人本身作为实验对象(即临床试验),具有很大的局限性,受到各种伦理及监管限制,但利用动物复制人疾病模型,进行疾病研究及药物开发,是人类健康发展的重要手段。但是应记住,任何一种动物模型都不能全部复制出人类疾病的所有表现,动物毕竟不是人体,模型试验只是一种间接性比较研究,只可能在某个局部或某一方面与人类疾病相似,因而模型试验的结果的正确性是相对的,最终还是需要在人体上进行验证,模型试验过程中会有各种与人类疾病不同的现象,必须分析差异的性质及程度,找出异同点及权重,以正确评估试验结果。 动物模型类别 自发性疾病动物模型特性无任何人工处理,自然条件下产生的有基因突变、缺失等经定向培育稳定遗传来的实验动物其发生、发展与人相应疾病非常相似(所以作为实验对象与诱发性动物模型相比,价值很高,药物敏感性差别很大) 诱发性动物模型特性又称为人工复制性动物模型,实验性动物模型通过物理(机械/放射/手术等)、化学(化学品/药物/致癌剂/酸碱物质等)、致病微生物(寄生虫/细菌/真菌/病毒等)、基因克隆技术(显微注射/RNAi/病毒载体/基因编辑)及复合性因素(同时包含物理、化学等两种以上)手段作用于动物复制动物模型。可标准化,人工操作控制,重复性好可短时间大量建模模型的实验结果于人疾病会存在某些差异性,对实验的外推延伸及研究的进一步有局限性。 动物模型RS常用人疾病动物模型心血管类(诱发性动物模型)呼吸类(诱发性动物模型)消化类(诱发性动物模型)内分泌代谢类(诱发性动物模型)神经系统类(诱发性动物模型)泌尿类(诱发性动物模型)肿瘤类(诱发性动物模型) 实验动物的级别(GB14922.1及GB14922.2)CV基础动物级别,饲养在开放系统CL清洁动物级别,饲养在清洁环境,不携带重大危害的有干扰的病原体动物SPF动物级别,饲养在洁净环境,不携带特定的病原体动物GF无菌动物级别,不携带任何微生物,通过剖腹产或无菌卵孵化出来的。(注:大小鼠只有CL、SPF、GF三个级别)