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报告基因（Reporter/Tag）小鼠模型优势与不足：优势：报告基因小鼠模型是一种在体研究启动子转录活性、蛋白表达定位或细胞转运的有力工具。不足：在目的基因的启动子后、编码序列前引入报告基因的同时会敲除目的基因。如果不想敲除目的基因，可以使用IRES或2A技术，共表达目的基因和报告基因。报告基因（Reporter/Tag）小鼠模型原理如果使用报告基因小鼠是为了监控基因启动子的转录活性，可以用报告基因的编码序列（如EGFP）替换目的基因的编码序列，在引入报告基因的同时敲除目的基因。如果使用报告基因小鼠是为了监控蛋白表达、定位及细胞转运，一种实现方法就是在目的基因的蛋白编码区末端加入一个短肽编码序列来标记蛋白。通过短肽抗体对短肽的识别，间接研究目的蛋白的表达及功能，这一方法尤其适用于没有抗体的目的蛋白。报告基因（Reporter/Tag）小鼠模型应用1、基因启动子的转录活性研究；2、在体监控蛋白的表达、定位或细胞转运；3药物的靶标确认；4、药物的临床前评价。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
优势与不足：优势：1、外源基因的重组位置确定；2、只有1个拷贝的插入；3、结合Cre-loxP系统，可以使外源基因在特定组织及特定时间表达；4、与随机转基因相比，需要的小鼠量小。不足：1、与随机转基因相比，模型构建需要的时间更长；2、遗传背景受到ES细胞背景的限制。Rosa26位点基因敲入小鼠模型原理：Rosa26基因敲入技术最早是由Phillipe Soriano建立并发展起来的。Rosa26位点有两个外显子，外源DNA序列插入两个外显子之间。在最初的设计中，目的基因cDNA上游带有一段转录终止序列“STOP”（3个拷贝的SV40多聚A序列，tPA）,转录终止序列的两端各有一个Loxp位点，将此结构定点嵌入Rosa26基因位置，整个结构的转录受Rosa26启动子控制。在没有Cre的情况下，由于Rosa26启动子与目的基因之间“STOP”的存在，目的基因不能被表达。如果有Cre表达， Cre重组酶将去除“STOP”，Rosa26启动子就可以启动目的基因表达。大量研究证实，Rosa26基因几乎在所有组织中都能编码一种非必需的核RNA，且为外源基因的插入热点。而Rosa26位点基因嵌入技术可以非常有效地建立多用途的条件性转基因小鼠模型，所以越来越受到科学家的青睐。但是，由于Rosa26启动子在某些组织中的启动能力有限，目的基因经常达不到研究人员需要的表达水平。为了解决这一问题，对原Rosa26基因敲入系统做了改进，引入一个强效的启动子，如CAG启动子, 该启动子由鸡actin启动子和CMV增强子融合而成，用这一杂合启动子代替Rosa26启动子，能够高效地启动目的基因表达。Rosa26位点基因敲入小鼠模型应用1、基因的过表达研究；2、外源基因在小鼠体内表达及功能研究。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
优势与不足：优势：能避免常规点突变导致的致死表型（胚胎干细胞致死、嵌合鼠致死或F1代杂合子小鼠致死），突变基因只在特定的细胞或组织中表达。不足：设计点突变策略时必须保证突变基因的表达水平及表达谱与野生基因的表达一致。组织特异性条件性点突变小鼠模型原理：条件性基因点突变主要是通过染色体位点特异性重组酶系统来实现的，如Cre-LoxP系统、 FLP-Frt系统和Dre-Rox系统等，其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统是在待突变的一段目的基因序列的两端各放置一个LoxP序列，得到Floxed（Flanked by loxP)小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶的小鼠杂交前，目的基因表达完全正常，从而能够避免全基因点突变可能出现的致死性表型。而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后，即可获得目的基因在特定的组织或细胞中表达突变蛋白的小鼠，而该基因在其它组织或细胞中表达正常。Floxed小鼠如果与不同的Cre重组酶小鼠杂交，可以使目的基因的突变发生在小鼠的任一组织或细胞中。此外，如果与控制Cre重组酶表达的诱导系统相结合，还可以使目的基因的突变发生在小鼠发育的任一阶段，实现对目的基因点突变的时空两方面调控。组织特异性条件性点突变小鼠模型应用：1、致死性目的基因的研究；2、药物的靶标确认；3、药物的临床前评价。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
优势与不足：优势：能避免常规点突变导致的致死表型（胚胎干细胞致死、嵌合鼠致死或F1代杂合子小鼠致死），使模型小鼠能够正常生长发育，在实验需要的发育时期给予诱导剂，小鼠表达突变蛋白。不足：设计点突变策略时必须保证突变基因的表达水平及表达谱与野生基因的表达一致。诱导性条件性点突变小鼠模型原理：诱导性的条件性基因敲除系统是基于细胞核激素受体与相应的激素配体结合后，细胞核激素受体将由细胞浆转位到细胞核发挥其基因表达调控作用。雌激素受体（ER）就是这样一种细胞核激素受体，它能结合雌激素，同时能结合雌激素的拮抗剂-他莫昔芬。当ER处于失活状态时，它在胞浆中与热休克蛋白90（Hsp90）结合，不能进入细胞核；但当胞浆中存在雌激素或他莫昔芬时，ER与Hsp90分离，同时与雌激素或他莫昔芬结合，并能够进入细胞核。利用ER的这一作用特点，将Cre重组酶与ER融合，当胞浆中没有雌激素或他莫昔芬时， CreER融合蛋白就会与Hsp90结合，CreER融合蛋白不能进入细胞核，从而将Cre重组酶滞留在胞浆；当胞浆中存在雌激素或他莫昔芬时，CreER融合蛋白与Hsp90分离，并与雌激素或他莫昔芬结合，从而能够进入细胞核。在细胞核中，Cre重组酶识别目的基因中的两个loxP位点并发挥其重组活性，获得基因敲除动物模型。在动物模型制备的应用中，为了消除内源性雌激素的影响，研究者将雌激素受体的配体结合区进行突变，从而使其不能与体内的生理性雌激素结合，而只能与外源性的雌激素类似物-他莫昔芬结合，这样就消除了内源性雌激素所造成的非特异性基因敲除，保证了Cre的表达受他莫昔芬的给药时间控制，目前常用的雌激素受体融合蛋白为CreERT2。同时Cre的表达受组织特异性启动子的调控，从而使Cre能在特定的组织或细胞表达。诱导性条件性点突变小鼠模型应用：1、致死性目的基因的研究；2、目的基因在发育或年龄相关疾病方面的研究；3、药物的靶标确认；4、药物的临床前评价。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
优势与不足：优势：小鼠突变基因的表达受野生基因的调控区调控。点突变也是一种功能性基因敲除方法，能够避免常规基因敲除模型引起的复杂表型，如信号通路作为常规基因敲除的补充策略或备用策略。不足：必须确认基因的表达水平及表达谱不受影响，组成性点突变可能是致死的，所以可能需要用到诱导性点突变或条件性点突变。 常规点突变（Conventional point mutation）小鼠模型应用1、引入基因突变；2、使蛋白的功能域失活（酶的催化部位、结合部位）；3、点突变模型有很多潜在的应用，包括研究突变与人类某些疾病的因果关系 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼