实验服务
一、实验动物大鼠，北京华阜康生物科技股份有限公司。二、主要仪器及试剂80/150/200目不锈钢细胞筛上海生工，中国电热压力蒸汽消毒器浙江绍兴医疗器械总厂超净工作台苏州净化设备公司二氧化碳培养箱三洋（Sanyo），日本电热恒温鼓风干燥箱上海跃进医疗器械厂低速台式离心机上海安亭科学仪器厂倒置显微镜 OLYMPUS，日本照像系统OLYMPUS，日本移液器Eppendorf，德国细胞计数板上海医用仪器厂细胞培养瓶及细胞培养板Costar，美国各种型号塑料离心管、移液枪头和冻存管 Axygen，美国0.22um纤维素滤膜 MILLIPORE，美国0.45um混合纤维素滤膜 MILLIPORE，美国剪刀、镊子中山恒基达医疗器械2、主要试剂DMEM培养基 Gibco，美国胎牛血清（FBS）Gibco，美国胰蛋白酶碧云天，中国PBS北京中杉青霉素-链霉素溶液（100X）碧云天，中国DMSOAmresco，美国3、主要试剂配制（1）PBS磷酸盐缓冲液： PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，121℃，30min高压灭菌，4℃冰箱保存。（2）DMEM细胞生长培养液：临用前根据需要按体积比10%加胎牛血清，最后按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，再加入5ng/mL的SCF，置于4℃冰箱保存。（3）细胞冻存液：生长培养基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清，加入10%的DMSO混合均匀，置于4℃冰箱保存。 三、实验步骤1. 取大鼠，使用7%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉，在无菌条件下迅速取出脂肪组织。 2. 用含１％青链双抗的D-Hank’s 液冲洗3次。剥离脂肪组织上的血管。 3. 将脂肪组织剪碎，直到组织变为液体状，加入8-10mL 胰酶，37℃消化90min。 4. 消化完成后，加入等量含血清DMEM 培养基终止消化，过200目筛网去除大块组织 5. 以1500r/min 离心5min，去上清液，加入含血清DMEM 培养基重悬细胞。 6. 接种至６ 孔板，放入细胞培养箱（37℃，CO2 浓度5％）。细胞稳定培养24h后换液，冲去未贴壁的细胞，更换DMEM培养基（成分同上）继续培养。以后每2天换液１ 次，注意观察培养基有无浑浊、颜色变淡、漂浮物和絮状物等 四、细胞形态大鼠脂肪间充质干细胞培养过程中，约24h即可贴壁生长，细胞呈长梭形生长速度较慢。换液后细胞增殖明显，出现以长梭形为主的形态，5- 7d 70%-80%可融合达到传代标准。传代细胞形态单一，呈长梭形。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】023-65316016,023-65316556【邮箱】china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼
一、实验动物清洁级SD大鼠，雌性，3-4周，若干，购于第三军医大学动物实验中心二、主要仪器及试剂1、主要实验仪器80/150/200目不锈钢细胞筛上海生工，中国电热压力蒸汽消毒器浙江绍兴医疗器械总厂超净工作台苏州净化设备公司二氧化碳培养箱三洋（Sanyo），日本电热恒温鼓风干燥箱上海跃进医疗器械厂低速台式离心机上海安亭科学仪器厂倒置显微镜 OLYMPUS，日本照像系统OLYMPUS，日本移液器Eppendorf，德国细胞计数板上海医用仪器厂细胞培养瓶及细胞培养板Costar，美国各种型号塑料离心管、移液枪头和冻存管 Axygen，美国0.22um纤维素滤膜 MILLIPORE，美国0.45um混合纤维素滤膜 MILLIPORE，美国剪刀、镊子中山恒基达医疗器械2、主要试剂 EBM-2Kit培养基LONZA ，瑞士胎牛血清Gibco，美国PBS北京中杉青霉 素-链霉素溶液（100×）碧云天，中国 EBM-2Kit培养基3、主要试剂配制（1）EBM-2Kit培养基：按说明书加入生长因子和血清（2%FBS）。（2）PBS磷酸盐缓冲液： PBS粉剂用ddH2O定容至1000 mL，调pH7.2，121℃、30min高压灭菌，4℃保存备用。三、 细胞操作实验方法（1）取SD大鼠，颈椎脱臼法处死后立即用75%乙醇浸泡，移入超净工作台内，用大头针固定大鼠四肢于工作台面的泡沫板上。（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉，PBS溶液冲洗两遍。（3）去除骨骺端，用1mL无菌注射器吸取DMEM溶液冲洗骨髓直至骨髓腔变白，吸入离心管内，1000rpm离心5min，弃上清。用PBS重悬细胞沉淀。（4）缓慢将细胞悬液加入预先装有5mL淋巴细胞分离液的15mL离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上层，注意不要搅动液面，保持二者分层界面。（5）2000rpm离心20min，离心后溶液分5层，吸取中间骨髓基质细胞层（白膜层），PBS洗3次。（6）用含生长因子和血清（2%FBS）的EBM-2培养基以106/mL细胞浓度接种于6孔板中，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养，48h后取出未贴壁细胞继续培养。四、无菌操作注意事项细胞培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯和臭氧杀菌1h，然后通风30min，操作前需要换细胞间专用拖鞋，双手带上一次性橡胶手套并用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上一次性口罩和帽子，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼
信号通路磷酸化水平检测芯片主要优势：1.芯片片基为专利技术的多聚膜覆盖，与点制在芯片表面的抗体形成共价结合，背景低；2.芯片上的抗体是专门针对磷酸化位点设计，每个位点有1对抗体，分别识别该位点的磷酸化与非磷酸化状态，且每个抗体都经过Western Blot验证，保证了特异性；3.芯片上所有磷酸化位点都是文献报道证实过的，均为充分理论支持，便于发现差异后的分析；4.由于磷酸化位点的保守性，该芯片通用于人、大鼠、小鼠样本。 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
蛋白质表达水平检测应用：1、蛋白差异表达筛选 2、蛋白表达谱分析3、疾病标志物筛选 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼
细胞因子抗体芯片采用multiplex sandwich ELISA system，能同时对来自血清、血浆、CSF、细胞裂解液以及其他体液中多重细胞因子的浓度进行定量检测(绝对定量)，结合了ELISA高特异性/灵敏度和芯片高通量的特点。客户提供：细胞因子抗体芯片的种类特别多，需要根据具体检测的细胞因子以及目的不同，从而来选择芯片的种类。客户课题提供以下内容，我们来给您推荐具体的芯片：1、客户的实验目的与要求；2、具体检测的细胞细胞因子；3、样本种属（人、小鼠、大鼠等）。样本要求：样品量: 50-100 μl，检测范围：5-3000 pg/ml 做实验，找威斯腾！【本平台合作项目】分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！【全国免费热线】：400-675-6758【电话】 023-65316016,023-65316556【邮箱】 china-western@163.com【官网网址】www.cqwestern.com【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼